具有最小交叉激发的中等亮度荧光染料
BD Horizon RealBlue™ 575（RB575）试剂基于一种创新的激光特异性荧光染料，主要由 488 nm 蓝色激光激发，可提供：
- 最小交叉激发
- 中等亮度，用于支持检测 中到高表达的表面与细胞内标记物
- 对于未配备黄绿激光的仪器，可作为 PE 的中等亮度替代方案； 在具有黄绿激光的适当配置仪器上，可与 BD Horizon RealYellow™ 586（RY586） 共同使用
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RB575 可用于适当配置的传统和光谱流式细胞仪上的中至高表达抗原标记物
| 类型 | 最大 激发 | 最大 发射 | 光谱流式细胞仪 | 传统流式细胞仪 | 相对亮度 | 溢漏* (1-low, 4-high) （1-低，4-高） | 替代染料 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| RB575 | 508 nm | 574 nm | ✓ | ✓ | 1 | PE, StarBright™ Blue 580 |
* 数值可能因仪器配置与设定不同而变化。溢出排名基于五激光光谱仪器的交叉激发，不包括对相邻探测器的溢出。
性能
BD Horizon RealBlue™ 575 试剂在 561-nm 黄绿激光下具有最小交叉激发
RB575 相比 PE 具有更低的交叉激发
RB575 与 PE 的标准化发射谱。PBMC 使用 human CD4 SK3 抗体染色并在 BD FACSDiscover™ S8 细胞分选仪上采集。
RB575 与 RY586 均由其主要激光激发，并可在同时配备蓝光与黄绿激光的仪器上配对使用
Applications
BD Horizon™ RB575 支持检测高表达标记物
人全血分别使用 BD Horizon™ RB575 小鼠 IgG1 κ 同型对照或 BD Horizon™ RB575 小鼠抗人 CD28 抗体进行染色，随后采用 BD Pharm Lyse™ 溶血缓冲液裂解红细胞。样本经 BD FACSymphony™ A5 SE 细胞分析仪采集，并在 FlowJo™ 软件中结合自发荧光进行光谱解混。
BD Horizon™ RB575 支持检测细胞内标记物
经刺激的 PBMC 使用 IFN-γ RB824 与 CD3 BUV395 进行染色。样本在 BD FACSymphony™ A5 SE 细胞分析仪上采集，并使用 FlowJo™ 软件进行光谱解混。
RB575 在单核细胞上具有较低非特异性背景
人全血分别使用 RB575、StarBright™ Blue 580（SBB580）、PE 或 PE-Cy7 CD19（除 SBB580 为 LT19 外，其余均为 SJ25C1）染色，并使用 BD Pharm Lyse™ 溶血缓冲液裂解。细胞在 BD FACSymphony™ A5 SE 上采集并在 FlowJo™ 软件中分析。其中，PE 和 PE-Cy7 分别在蓝激光的 BP-B576 和 BP-B810 探测器上进行峰值检测。
RB575 相比 PE 具有改进的缓冲液兼容性
A）PBMC 分别使用 BD Horizon™ RB575 或 PE-CD3（UCHT1）进行染色，随后使用 BD Phosflow™ Perm Buffer III 进行固定与透化。
B）全血分别使用 BD Horizon™ RB575 或 PE-CD4（SK3）染色，并以 BD FACS™ Lysing Solution 进行溶血和固定处理，之后使用 BD FACS™ Permeabilizing Solution 2 进行透化。
RB575在备货型生产试剂和BD OptiBuild™按需生产试剂之间具有批间一致性。
BD Horizon™ RB575 试剂在备货型生产试剂与 BD OptiBuild™ 按需生产试剂之间表现出稳定性能，并在不同批次之间保持良好一致性。人全血分别使用三批不同染料批次的 RB575-CD3（UCHT1，左图）或 RB575-CD4（SK3，右图）进行染色，并使用 BD Pharm Lyse™ 溶血缓冲液处理。所有特异性检测均在 Cytek™ Aurora 光谱分析仪上完成。
多色流式细胞术
RB575 在传统与光谱流式 Panel 中表现良好
RB575 可在光谱细胞分选仪中与邻近荧光染料良好配合
相似性指数由 BD FACSDiscover™ S8 细胞分选仪生成。结果显示 RB575 与现有的邻近染料及跨激光染料具有良好兼容性。但其与 NovaFluor™ B585（NF B585）和 Spark Blue™ 575（Spark B574）的相似性指数均 ≥0.95，因此不建议在同一 panel 中共同使用。
RB575 适用于 BD FACSLyric™ 12 色免疫监测 Panel
全血首先使用 BD Pharm Lyse™ 溶血缓冲液进行批量溶血，随后洗涤并染色 BD Horizon™ Fixable Viability Stain 510，再进行其他表面标记物染色。细胞以 4% PFA 固定后，在 BD FACSLyric™ 细胞分析仪上采集，并使用 FlowJo™ 软件进行分析。
12 色人类免疫监测 Panel 的荧光染料分配
| Specificity | Clone | Fluorochrome | |
|---|---|---|---|
| Violet 405 nm | CCR7 | 2-L1-A | BV421 |
Viability | N/A | FVS510 | |
CD20 | 2H7 | BV605 | |
CD14 | MɸP9 | BV711 | |
CD3 | UCHT1 | RV828 | |
| Blue 488 nm | CD4 | SK3 | FITC |
CD8 | RPA-T8 | RB575 | |
CD16/56 | 3G8/B159 | RB705 | |
CD45RA | HI100 | RB780 | |
| Red 640 nm | CD19 | SJ25C1 | APC |
CD95 | DX2 | R718 | |
CD45 | 2D1 | APC-H7 |
缓冲体系兼容性
BD Horizon™ RB575 兼容多种固定与破膜体系
| Buffers | Results |
| BD FACS™ Lysing Solution and BD Pharm Lyse™ Lysing Buffer | Compatible |
| CellBlox™ Blocking Buffer | Compatible |
| BD Cytofix™ Fixation Buffer | Stable at least 24 hours |
| 1% PFA | Stable at least 24 hours |
| BD Cytofix/Cytoperm™ Fixation and Permeabilization Solution | Compatible with antibody staining before and after fixation |
| BD FACS™ Permeabilizing Solution 2 | Compatible with antibody staining before and after fixation |
| BD Phosflow™ Perm Buffer III | Compatible with antibody staining before and after fixation |
| EDTA and Heparin | Compatible |
| BD Horizon™ Brilliant Stain Buffer (BSB) | Compatible |
RESOURCES
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仅用于科研，不用于诊断或治疗。不得转售。
BD 流式细胞仪为 1 类激光产品。
BD FACSLyric™ 流式细胞仪仅适用于科研用途，并在 BD FACSuite™ 应用中支持最多 12 色，不适用于诊断或治疗程序。