BD Horizon RealBlue™ 613试剂

用于高参数流式细胞术Panel和光谱流式细胞术Panel的高亮度荧光染料

BD Horizon RealBlue™ 613（RB613）试剂采用创新型激光特异性荧光染料，主要由488 nm蓝色激光激发，具备以下优势：

降低来自561 nm黄绿色激光的交叉激光激发
高亮度荧光染料，支持检测低表达的表面和胞内标志物
与配备适用检测器的光谱流式细胞仪和传统流式细胞仪兼容

RB613试剂可用于更高参数的流式细胞术Panel，提高生物分辨率

类型	最大激发	最大发射	光谱流式细胞仪	传统流式细胞仪	相对亮度	*溢漏 (1-低，4-高)**	替代染料
RB613	492 nm	613 nm	✓	✓		2	PE-CF594, PE-Dazzle™ 594, StarBright™ Blue 615, NovaFluor™ Blue 610, cFluor™ BYG610, BB630-P2

类型

最大
激发

最大
发射

光谱流式
细胞仪

传统流式
细胞仪

相对亮度

溢漏* (1-低，4-高)

替代染料

RB613

492 nm

613 nm

✓

PE-CF594, PE-Dazzle™ 594,

StarBright™ Blue 615,

NovaFluor™ Blue 610,

cFluor™ BYG610,

BB630-P2

*具体数值可能因仪器配置和设置而异。溢漏等级基于五激光光谱仪器的交叉激光激发情况，不包含进入相邻检测器的溢漏情况。

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性能

RB613主要由488 nm蓝色激光激发

对于配备488 nm蓝色激光的流式细胞仪，BD Horizon RealBlue™ 613试剂是最佳选择

RB613与PE-CF594荧光染料的标准化发射光谱。在BD FACSDiscover™ S8细胞分选仪上采集人CD4 SK3抗体。

RB613试剂可降低交叉激光激发

使用BD Horizon™ RB613人CD4（克隆SK3）抗体对人PBMC进行染色，在BD FACSDiscover™ S8细胞分选仪上进行采集，并使用FlowJo™软件进行解混。

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应用

BD Horizon™ RB613试剂可用于解析低表达表面标志物

使用BD Horizon™ PE-CF594或BD Horizon™ RB613试剂的CD279（EH12.1）对人全血进行染色，并使用APC CD3试剂（UCHT1）进行共染色；随后在BD FACSymphony™ A5 SE流式细胞仪上进行采集，并在FlowJo™软件中进行补偿。

BD Horizon™ RB613试剂可用于解析胞内标志物

使用BD Pharmingen™转录因子缓冲液套装对人PBMC进行固定和破膜。随后，使用PE-CF594（左图）或RB613（右图）FoxP3（259D/C7）对细胞进行染色，并使用APC CD4（SK3）进行共染色；之后在BD FACSymphony™ A5 SE流式细胞仪上进行采集，并在FlowJo™软件中进行补偿。

B613 FoxP3- ntracellular Transcription- actor Detection

RB613在备货型生产试剂和BD OptiBuild™按需生产试剂之间具有批间一致性

BD Horizon™ RB613试剂表现出稳定的性能，在备货型生产试剂和BD OptiBuild™按需生产试剂之间具有批间一致性。分别使用四个不同染料批次的RB613对人CD3（UCHT1，左图）或CD4（SK3，右图）对人全血进行染色，随后使用BD FACS™流式细胞分析用溶血素进行溶血处理。通过BD FACSymphony™ A5 SE流式细胞仪采集所有样本。BD Horizon™和BD OptiBuild™试剂均在单独的实验中进行了测试。

多色流式细胞术

BD FACSDiscover™ S8细胞分选仪采集的22色光谱流式细胞术Panel中，BD Horizon™ RB613试剂具有出色的分辨率

在22色人谱系Panel中，RB613可与RY610试剂有效结合使用

在使用BD Pharm Lyse™裂解缓冲液对大量红细胞进行裂解之前，使用针对细胞表面标志物的抗体对新鲜人外周全血样本进行染色。随后，通过BD FACSDiscover™ S8细胞分选仪对细胞进行分析，并使用FlowJo™软件v10.9进行分析。所示为在排除粘连细胞和B细胞后用于检测NK细胞和T细胞亚群的圈门策略。

22色光谱流式细胞术Panel的荧光染料标志物分配

	特异性	克隆	荧光染料
UV 349 nm	CD56	R19-760	BUV395
	AutoF	N/A	N/A
	CD20	L27	BUV496
	CD14	M5E2	BUV615
	CD127	HIL-7R-M21	BUV737
	IgD	IA6-2	BUV805
Violet 405 nm	IgM	G20-127	BV421
	CD38	HIT2	BV480
	CD8	RPA-T8	BV605
	IgG	G18-145	BV650
	CD16	3G8	BV711
	CD19	SJ25C1	BV786
Blue 488 nm	CD45	HI30	FITC
	CD24	ML5	RB545
	CD25	2A3	RB613
	CD123	7G3	RB705
	TCRgd	11F2	RB744
	BAFF-R (CD268)	11C1	RB780
Yellow-Green 561 nm	CD10	HI10a	RY586
Yellow-Green 561 nm	CD3	UCHT1	RY610
Red 637 nm	CD4	SK3	APC
	CD27	M-T271	R718
	HLA-DR	L243	APC-H7

通过BD FACSDiscover™ S8细胞分选仪采集的22色光谱流式细胞术Panel的荧光染料标志物分配。

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缓冲液兼容性

BD Horizon RealBlue™ 613试剂可与多种固定系统和破膜系统广泛兼容

缓冲液	结果
BD FACS™流式细胞分析用溶血素和BD Pharm Lyse™裂解缓冲液	兼容
BD Cytofix™固定缓冲液	至少在24小时内稳定
1%多聚甲醛（PFA）	至少在24小时内稳定
BD Cytofix/Cytoperm™固定破膜剂	与固定前后抗体染色兼容
BD FACS™破膜剂2	与固定前后抗体染色兼容
BD Phosflow™破膜缓冲液III	与固定前后抗体染色兼容
EDTA和肝素	兼容
BD Horizon™ Brilliant染色缓冲液（BSB）	兼容