BD CellView™ 成像技术

概览

BD CellView™成像技术是一种实时成像（RTI）技术，可将流式细胞术数据与空间和形态学信息相结合。该技术能够高效应对复杂的生物学问题，例如探索细胞如何生长、发挥作用以及相互作用，或研究细胞内病毒或蛋白质的确切位置。该技术还可无缝集成每个事件的成像和流式数据，并可在采集过程中轻松查看事件成像。它实现了对目标细胞的实时目视检查，可利用荧光空间分布功能，基于实时成像特征分析提供新型圈门策略，增强了荧光激活细胞分选（FACS）技术。

BD CellView™成像技术与基于相机的成像流式细胞术的比较

与其他基于相机的成像流式细胞术不同，BD CellView™成像技术不使用相机对细胞成像，因此成像速度更快。基于相机的技术需要严格控制液流，无法用于高速液滴细胞分选。BD CellView™成像技术采用正交频分复用（OFDM）技术，利用流式细胞仪中已使用的电子组件和光学组件对细胞进行成像。与基于相机的技术相比，BD CellView™成像技术的通量更快。在采集样本的同时，该技术可以高速实时采集和量化成像数据，以便进行分析和分选。

BD CellView™成像技术的原理

成像特征定义

偏心率

偏心率是已鉴定颗粒（由分析区域鉴定）的最短轴与最长轴的比率

用途示例：双峰鉴别、胞簇鉴定

可用对象：所有成像通道

最大强度

最大强度是成像中最亮像素的强度。它不受分析区域的影响。

用途示例：点状荧光、吞噬测定、细胞周期分析

可用对象：所有成像通道

尺寸

尺寸是指成像中亮度高于用户定义的像素阈值的像素数量。

用途示例：无标记分选、点状荧光

可用对象：所有成像通道

径向力矩

径向力矩是指分析区域内各像素距中心点的平均距离。

用途示例：双峰鉴别（带偏心率）、细胞间相互作用（细胞突触）

可用对象：所有成像通道

Delta 质心

分析区域所定义的颗粒内任意两个成像通道中的两个荧光信号源之间的距离

可用对象：任意两个成像通道

前向散射光 (FSC)

当颗粒（细胞）通过激光时，光与颗粒的相互作用会导致光朝各个方向散射。

前向散射光检测器与激光路径保持一致，用于测量小角度散射的光。前向散射光与颗粒（细胞）尺寸大致相关。

侧向散射光 (SSC)

当颗粒（细胞）通过激光时，光与颗粒的相互作用会导致光朝各个方向散射。

侧向散射光检测器测量与激光路径垂直（90°）的散射光。侧向散射光与颗粒的光密度或复杂程度大致相关。

光损失（成像）

当颗粒（细胞）通过激光时，光与颗粒的相互作用会导致光朝各个方向散射。

光损失是指由于颗粒（细胞）通过激光时对光的散射和吸收而损失的光（光子）。

样本数据

利用成像特征测量荧光信号的相对位置并跟踪细胞群的形态变化

先用TNF-α处理HT-1080纤维肉瘤细胞，再用FITC标记的二抗固定、透化和染色p65（NFκB）。然后用DNA染料DRAQ5™对细胞进行复染。BD CellView™成像技术能够测量NFκB FITC信号与DNA DRAQ5™信号之间的相对空间相关度。相关度评分为1则表示两个信号在空间分布上所占的空间相同。

利用实时成像特征分析测量两个荧光信号之间的空间相关度。

对HT-1080纤维肉瘤细胞的TNF-α滴定显示了不同程度的易位。相关度评分可测量易位的相对程度。

高浓度TNF-α会诱导NFκB从细胞质转移到细胞核中。NFκB的绿色荧光信号和DNA的红色荧光信号合并后呈黄色显示。

利用成像特征进行双峰鉴别以提高纯度

排除双峰和团块是确定纯度分选的关键性初步步骤。在进行下游功能和/或基因组分析时，双峰可能会混淆纯度，导致意外结果或额外费用。本文试图展示利用成像的分选仪在双峰鉴别方面的改进。通过Ficoll™分离法从五名健康供体身上制备外周血单个核细胞（PBMC）。用DRAQ5™对制备好的样本进行复染，DRAQ5™是一种可渗透膜的DNA嵌入染料，与BD CellView™成像技术兼容。根据DNA含量跟踪双峰频率，并将传统的基于散射光的双峰策略与基于成像的方法进行比较。然后比较每个圈门中单峰和非单峰（双峰和团块）的含量。