BD Horizon RealBlue™ 545试剂

光谱流式细胞术荧光染料的纯净之选

BD Horizon RealBlue™ 545（RB545）试剂采用创新型激光特异性荧光染料，主要由488 nm蓝色激光激发，具备以下优势：

极少的561 nm黄绿色激光交叉激发
中等亮度荧光染料，支持检测高表达的表面和胞内标志物
针对光谱流式细胞仪实现兼容性优化设计

RB545试剂专为光谱流式细胞术Panel优化设计

类型	最大激发	最大发射	光谱流式细胞仪	传统流式细胞仪	相对亮度	*溢漏 (1-低，4-高)**	替代染料
RB545	496 nm	545 nm	✓	_		1	Spark Blue™ 550

*具体数值可能因仪器配置和设置而异。溢漏等级基于五激光光谱仪器的交叉激光激发情况，不包含进入相邻检测器的溢漏情况。

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性能

BD Horizon™ RB545试剂的黄绿色激光交叉激发极少

RB545试剂的交叉激光激发极少

RB545试剂的标准化发射光谱，来自561 nm黄绿色激光的激发极少。在BD FACSDiscover™ S8细胞分选仪上采集人CD4 SK3抗体。

RB545在多路激光条件下向各检测器的溢漏扩散较低

使用BD Horizon™ RB545人CD4（SK3）试剂对人全血进行染色，在BD FACSymphony™ A5 SE流式细胞仪上进行采集，并使用FlowJo™软件进行补偿。

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应用

BD Horizon™ RB545试剂支持胞内标志物的检测

在存在BD GolgiStop™蛋白质转运抑制剂的情况下，使用PMA和离子霉素对人PBMC刺激5小时，然后使用BD Horizon™ RB545试剂或FITC IFN-γ（B27）以及匹配的同种型对照品进行染色。通过BD FACSymphony™ A5 SE流式细胞仪采集样本。

Rb545 Intracellular-Cytokine-Marker-Detection

BD Horizon™ RB545试剂支持中到高抗原密度表面标志物的检测

使用mCD4（GK1.5）BD Horizon™ RB545试剂（左图）或FITC（右图）对小鼠脾细胞进行染色，并在BD FACSymphony™ A5 SE流式细胞仪上进行采集。

RB545可在光谱流式细胞术中与FITC结合使用

RB545与FITC的光谱解混。来自健康供体的PBMC分别以单色CD4（使用RB545或FITC）染色并进行光谱解混的双变量叠加图。通过BD FACSymphony™ A5 SE流式细胞仪采集样本，并使用FlowJo™（版本10.8）软件进行光谱解混。

RB545 and FITC Usage in Multicolor Flow Cytometry

在高参数光谱流式细胞术Panel中与BD Horizon Brilliant™ Blue 515（BB515）试剂结合使用时，BD Horizon RealBlue™ 545试剂是FITC的理想替代方案。

分别使用以下两组试剂对人PBMC进行染色：中度相似的CD4 RB545/CD127 BB515与高度相似的CD4 FITC/CD127 BB515。高度相似的组合试剂出现分辨率下降，如下排所示（CD4 FITC/CD127 BB515）。通过BD FACSymphony™ A5 SE流式细胞仪采集样本，并使用FlowJo™软件进行分析。

RB545 Reagents are a Superior Alternative to FITC

BD Horizon RealBlue™ 545试剂具备批间一致性与光稳定性

RB545试剂表现出稳定的性能，在备货型生产试剂和BD OptiBuild™按需生产试剂之间具有批间一致性。经证实，这些试剂在典型的实验室照明或昏暗的核心实验室照明下均具有光稳定性。使用人CD4（SK3）RB545试剂对人全血进行染色，然后使用四种不同染料批次的BD FACS™流式细胞分析用溶血素进行溶血处理（左图）。使用四种不同染料批次的小鼠CD8a（53-6.7）对小鼠脾细胞进行染色（右图）。所有特异性检测均通过BD FACSymphony™ A5 SE流式细胞仪采集。

多色流式细胞术

RB545可在光谱流式细胞仪中与FITC结合使用

在通过BD FACSymphony™ A5 SE流式细胞仪采集的8色TBNK Panel中，RB545可与FITC实现清晰区分

FITC and RB545 Usage in Spectral-Flow Cytometry

使用8色TBNK Panel对人全血进行染色，并使用BD FACSLyse™裂解缓冲液进行裂解。然后，在BD FACSymphony™ A5 SE流式细胞仪上进行采集，并使用FlowJo™软件进行光谱解混。所用试剂包括CD3（UCHT1）BUV737、CD4（SK3）RB545、CD8（SK1）FITC、CD16（3G8）APC、CD19（SJ25C1）PE、CD20（2H7）APC-H7、CD45（HI30）BUV395及CD56（NCAM16.2）BV421。

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缓冲液兼容性

BD Horizon RealBlue™ 545试剂可与多种固定系统和破膜系统广泛兼容

缓冲液	结果
BD FACS™流式细胞分析用溶血素和BD Pharm Lyse™裂解缓冲液	兼容
CellBlox™ Blocking Buffer	Compatible
BD Cytofix™固定缓冲液	至少在24小时内稳定
1%多聚甲醛（PFA）	至少在24小时内稳定
BD Cytofix/Cytoperm™固定破膜剂	与固定前后抗体染色兼容
BD FACS™破膜剂2	与固定前后抗体染色兼容
BD Phosflow™破膜缓冲液III	与固定前后抗体染色兼容
EDTA和肝素	兼容
BD Horizon™ Brilliant染色缓冲液（BSB）	兼容