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明亮、干净的染料
BD Horizon RealBlue™ 824(RB824)试剂基于创新的、激光特异性的荧光染料开发,主要由 488 nm 蓝色激光激发,并能够提供:
- 极低的交叉激发
- 高亮度荧光,适用于低表达水平的表面和细胞内标记物检测
- 在蓝色激光通道下的近红外(NIR)检测位置
将 RB824 与低至中等抗原表达的标记物搭配使用,以充分发挥蓝光激光线的性能
| 格式 | 激发峰 | 发射峰 | 光谱 | 传统 | 相对亮度 | Spillover* (1低,4高) | 替代 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| RB824 | 488 nm | 824 nm | ✓ | ✓ | 1 | PerCP/Fire™ 806, StarBright™ Blue 810 |
* 数值可能因仪器配置与设置而变化。溢出等级基于五激光光谱仪器上的交叉激发,不包含对相邻探测器的溢出。
性能
BD Horizon RealBlue™ 824 试剂在 561 nm 黄绿激光下表现出极低的交叉激发
RB824 具有极低的交叉激发
RB824、PerCP/Fire™ 806、StarBright™ B810(SBB810)和 NovaFluor™ B800(NFB800)的标准化发射谱。 PBMC 使用 human CD4 SK3 抗体染色,并在 BD FACSDiscover™ S8 细胞分选仪上采集数据。
与 PerCP/Fire™ 806 和 StarBright™ Blue 810 相比,RB824 在黄绿激光染料上的扩散更小
全血使用 CD4 RB824、StarBright™ Blue 810(SBB810)、PerCP/Fire™ 806、StarBright™ Yellow 800(SBY800)或 PE/Fire™ 810 染色,并使用 BD Pharm Lyse™ 溶血缓冲液进行溶血。图中为单色叠加图:
A)RB824 或 SBB810 与 SBY800 的叠加。
B)RB824 或 PerCP/Fire™ 806 与 PE/Fire™ 810 的叠加。样本在 Cytek™ Aurora 光谱分析仪上采集,并使用 FlowJo™ 软件进行光谱解混。
应用
全血使用 CD279 RB824 和 CD3 BUV395 染色,并使用 BD Pharm Lyse™ 溶血缓冲液进行溶血。样本在 BD FACSymphony™ A5 SE 细胞分析仪上采集,并使用 FlowJo™ 软件进行光谱解混。
刺激后的 PBMC 使用 IFN-γ RB824 和 CD3 BUV395 进行染色。样本在 BD FACSymphony™ A5 SE 细胞分析仪上采集,并使用 FlowJo™ 软件进行光谱解混。
将 Human CD4 RB824、PerCP/Fire™ 806 或 StarBright™ Blue 810 试剂暴露在 600 lux LED 光下 0、1、2 或 3 小时,然后用于全血染色。血液通过 BD FACS™ Lysing Solution 溶血。样本在 Cytek™ Aurora 光谱分析仪上采集,并使用 FlowJo™ 软件进行分析。
BD Horizon™ RB824 试剂在货架型试剂与 BD OptiBuild™ 现配试剂之间均表现出稳定且一致的性能,展现了良好的批次间一致性。实验中,人全血分别使用来自三个不同染料批次的 RB824 对 CD3(UCHT1,左图)或 CD4(SK3,右图)进行染色,随后使用 BD Pharm Lyse™ 溶血缓冲液进行溶血处理。所有特异性检测均在 Cytek™ Aurora 光谱分析仪上完成。需要说明的是,CD3 与 CD4 的检测分别在不同的实验中独立进行。
多色流式细胞术
BD Horizon™ RB824 试剂在 BD FACSDiscover™ A8 上的 24 色 T 细胞活化 Panel 中表现出良好分辨率
T 细胞亚群 gating 策略
从健康供体分离 PBMC,并分为两个条件:未刺激组和使用 CytoStim™(Miltenyi Biotec)刺激组。24 小时后,收集两组样本并用 CD45 进行标记。在刺激组样本中加入 CAR T 细胞。随后使用包含 BD Horizon RealViolet™ 828(RV828)和 RB824,以及 BD CD19 CAR 检测试剂的 24 色 T 细胞活化 Panel 的剩余 23 个标记物进行染色,并在 BD FACSDiscover™ A8 细胞分析仪上进行分析。
A)未刺激 PBMC 的 T 细胞表型分析的 gating 策略。
B)伪彩图显示在与 CAR T 细胞混合的刺激 PBMC 样本中检测 CD19 CAR⁺ T 细胞。等高线图显示未刺激 PBMC、刺激 PBMC 和 CD19 CAR⁺ T 细胞中记忆、活化和抑制性标记物的表达。
24 色人 T 细胞活化 Panel 的荧光染料与标记物分配
| Specificity | Clone | Fluorochrome | |
|---|---|---|---|
| UV 349 nm | CD8 | RPA-T8 | |
CD45 | HI30 | ||
CD25 | 2A3 | ||
| Violet 405 nm | CCR7 | 2-L1-A | |
CD45RA | HI100 | ||
Viability | N/A | ||
CD20 | 2H7 | ||
CD3 | UCHT1 | ||
| Blue 488 nm | CD28 | CD28.2 | |
CD95 | DX2 | ||
CCR6 | 11A9 | ||
CXCR3 | 1C6/CXCR3 | ||
CD127 | HIL-7R-M21 | ||
KLRG1 | Z7-205.rMAb | ||
CD45RO | UCHL1 | ||
| Yellow-Green 561 nm | TIM-3 | 7D3 | |
CD69 | FN50 | ||
TCRγδ | 11F2 | ||
CD56 | B159 | ||
CD16 | 3G8 | ||
CCR4 | 1G1 | ||
| Red 637 nm | CD19 | N/A | |
PD-1 | EH12.1 | ||
TIGIT | TgMab-2 | ||
CD4 | RPA-T4 |
Fluorochrome marker assignment for a 24-color spectral flow cytometry panel acquired on the BD FACSDiscover™ A8 Cell Analyzer.
缓冲兼容性
BD Horizon™ RB824 试剂与多种固定破膜体系兼容
| Buffers | Results |
| BD FACS™ Lysing Solution and BD Pharm Lyse™ Lysing Buffer | Compatible |
| CellBlox™ Blocking Buffer | Compatible |
| BD Cytofix™ Fixation Buffer | Stable at least 24 hours |
| 1% PFA | Stable at least 24 hours |
| BD Cytofix/Cytoperm™ Fixation and Permeabilization Solution | Compatible with antibody staining before and after fixation |
| BD FACS™ Permeabilizing Solution 2 | Compatible with antibody staining before and after fixation |
| BD Phosflow™ Perm Buffer III | Compatible with antibody staining before and after fixation |
| EDTA and Heparin | Compatible |
| BD Horizon™ Brilliant Stain Buffer (BSB) | Compatible |
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Brochure
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Poster
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Performance Guide and Chart
BD 流式细胞仪为 1 类激光产品。仅用于科研目的,不用于诊断或治疗程序。
CF 为 Biotium, Inc. 的商标。Cy 为 Cytiva 旗下 Global Life Sciences Solutions Germany GmbH 或其关联企业的商标。CellBlox 为 Thermo Fisher Scientific 的商标。