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Panel设计

 

Overview
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多色流式细胞仪是一种强大的技术,能够在单细胞水平同时分析多个标记物。随着可检测参数数量的增加,多色检测实验配色方案的设计可能具有挑战性,需要了解可能影响panel性能的几个因素:

 

  • 生物学——抗原密度和抗原共表达
  • 荧光染料——亮度和溢出
  • 仪器——配置和设置

 

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步骤1

定义您的实验假设


定义您的实验假设是panel设计的第一步,开始识别:

  • 您试图获得的生物信息
  • 您希望询问的细胞群
  • 是否在细胞表面或细胞内发现靶点 
 
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观看流式细胞仪panel设计步骤1视频,开始您的panel设计过程。

步骤2

标记物选择


在panel设计过程的第二步中,您将需要确定为识别感兴趣细胞群所需的标记物及其数量。

请注意:

  • 标记物表达水平
  • 一级抗原:以高密度表达,通常定义细胞谱系
  • 二级抗原:通常在一个连续体上表达
  • 三级抗原:以低密度表达的关键标记物
  • 标记物共表达,尤其是暗淡标记物
  • 识别您希望询问的细胞群所需的门控策略
 
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观看流式细胞仪panel设计步骤2视频,了解识别关键细胞群和选择所需标记物进行分析的复杂性。

步骤3

了解您的流式细胞仪


了解您的仪器至关重要,了解仪器配置可以让您知道仪器可以检测多少标记物和哪些荧光染料。

需要考虑的因素包括:

  • 用于激发的激光波长
  • 每种激光的检测器数量
  • 可用于检测荧光染料的过滤器
 
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观看流式细胞仪panel设计步骤3视频,了解并最大程度地发挥流式细胞仪的功能,以实现最佳的panel设计。

步骤4

荧光染料分配


仔细选择荧光染料,以分辨所有表达水平的标记物,并尽量减少光谱重叠。考虑使用荧光分辨率排序和光谱查看器等工具来帮助评估:

  • 荧光分辨率
  • 交叉激光激发
  • 荧光溢出

记住将明亮的荧光染料与低表达抗原配对,将暗淡的荧光染料与高表达抗原配对。记住传播只影响共表达标记物的分辨率。

 
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观看流式细胞仪panel设计第4步视频,学习最佳panel设计的荧光染料和抗原匹配策略,以获得最佳的panel设计。

步骤5

检查panel

检查panel设计并开始订购试剂。记住您滴定的质量浓度试剂,并优化染色方案。包括补偿的适当对照、FMO和生物对照,以帮助确保最佳的panel性能。

 

下载 “流式细胞仪panel设计流程” 信息图,找到更多panel设计技巧和一些有趣信息。

 

点击下载
 
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Videos
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多色流式细胞术多色实验方案设计视频

为更简单、更智能的多色实验方案设计增加坚实的基础

 

全面概述多色实验方案设计的基本原理和简化多色实验方案设计的不同方法

 

流式细胞仪仪器表征和最佳panel设计设置

本视频解释了如何充分利用流式细胞仪配置来帮助感兴趣细胞群的分辨率最大化。

 
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使用固定和透化缓冲液进行细胞间染色时避免分辨率损失

在本视频中,您将学习帮助防止由于细胞内固定和透化缓冲液导致的分辨率损失。

 
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了解和管理荧光溢出

在本视频中,您将学习如何管理荧光溢出,以充分利用您的流式细胞仪试验。

 
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荧光溢出与扩散的关系

本视频将帮助您了解荧光溢出和传播之间的关系,以帮助您实施正确的策略来分辨您感兴趣的种群。

 
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在流式细胞仪实验中尽可能减少传播的影响

这段视频提供了帮助最大限度减少流式细胞仪实验中扩散影响的策略,以帮助提高分辨率。

 
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最佳荧光染料-抗原匹配的panel设计工作流程

本视频提供了荧光染料-抗原匹配的简单策略,以帮助防止引入扩散和随后的分辨率损失。

 
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BD Horizon™ Tour 系列
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BD Horizon™ 系列

目标:细胞表面和细胞内染色的panel设计原则

本次网络研讨会探讨了概念、最佳实践和可用的工具,帮助您高效导航多色流式细胞仪。

 

演讲者

Andrew D. Bantly

技术应用专家

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多色流式细胞仪的哨兵标记方法:使用关键标记物定义细胞亚群以扩展仪器能力的实验设计

发现一种观察荧光染料和标记物的新方法,该方法可将任何仪器上可实现的参数数量最大化。

演讲者

Bob Balderas, MBA

生物科学及市场开发副总裁

碧迪医疗生物科学

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解决:管理仪器设置以解决荧光溢出并使分辨率最大化

本次网络研讨会全面介绍了管理仪器设置的最佳实践,以帮助您最大化仪器参数,同时尽量减少溢出和分辨率损失。

演讲者

Alan Stall

首席科学家

碧迪医疗生物科学

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提升:在选择合适的荧光染料/抗体组合中表面抗原密度和细胞内表位可用性的重要性

该网络研讨会探索了了解与抗体/荧光染料组合相关的抗原密度(细胞表面受体的数量)对于最佳panel设计的重要性。  

演讲者

Bob Balderas, MBA

生物科学及市场开发副总裁

碧迪医疗生物科学

 

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显示:相对荧光亮度在分辨感兴趣细胞群中的意义

本次网络研讨会通过了解细胞的生物学和荧光染料的相对亮度,探索了使用流式细胞仪寻找所隐藏本质的过程。

演讲者

Bob Balderas, MBA

生物科学及市场开发副总裁

碧迪医疗生物科学

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BD Harmony 系列
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BD Harmony系列

咨询专家—更简单、更智能的多色实验方案设计的坚实基础

本次网络研讨会为观众提供了通过解决常见问题来设计优化的多色流式细胞术实验方案的实用策略。  

演讲者

Bob Balderas,MBA

生物科学副总裁和市场开发副总裁

BD Life Sciences–Biosciences

Mirko Corselli, PhD

全球科学内容经理

BD Life Sciences–Biosciences

Rui Gardner, PhD

流式细胞术核心机构负责人

史隆凯特琳癌症研究中心

Yolanda Mahnke, PhD

创始人

FlowKnowHow LLC

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为更简单、更智能的流式细胞仪多色实验方案设计提供坚实的基础:Harmony研讨会系列

本次网络研讨会是Harmony系列的一部分,为观众提供多色实验方案设计最佳实践,重点是溢出和识别最佳的荧光染料组合,以简化多色实验方案设计。

发言人

Mirko Corselli, PhD

全球科学内容经理

研究解决方案,BD生命科学–生物科学

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更简单、更智能多色实验方案设计的坚实基础

该网络研讨会探讨了帮助客户为多色实验方案设计创建坚实基础的策略 

演讲者

Bob Balderas,MBA

生物科学副总裁和市场开发副总裁

BD生命科学–生物科学

 

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其他

BD多色实验方案设计事宜:设计流式细胞仪多色实验方案的实践

该网络研讨会探索了最小化流式细胞仪多色实验方案设计痛点以及多色实验方案优化的策略

发言人

Alan Stall

BD研究员,首席科学家,BD生命科学–生物科学

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在高维流式细胞术时代更轻松地进行流式方案设置

该网络研讨会为提高流式细胞仪多色实验方案设计过程的效率提供了全面的策略

发言人

Anis Larbi, PhD

A*STAR流式细胞术机构负责人,免疫监测平台和主要研究者,衰老生物学项目

新加坡免疫学网络(SIgN)

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补偿事项:设计流式细胞仪多色实验方案时的注意事项

本次网络研讨会提供了关于补偿最佳实践的稳健概述,以帮助实现您的解决方案目标。

发言人

Alan Stall

BD研究员,首席科学家,BD生命科学生物科学

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Resources
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出版物
  • Mahnke YD, Roederer M. Optimizing a multicolor immunophenotyping assay. Clin Lab Med. 2007;27(3): 469–485, v. doi: 10.1016/j.cll.2007.05.002

  • Mair F, Tyznik A. High-dimensional immunophenotyping with fluorescence-based cytometry: a practical guidebook. Methods Mol Biol. 2019;2032:1-29. doi: 10.1007/978-1-4939-9650-6_1

  • Nguyen R, Perfetto S, Mahnke YD, Chattopadhyay P, Roederer M. Quantifying spillover spreading for comparing instrument performance and aiding in multicolor panel design. Cytometry A. 2013;83(3):306-315. doi: 10.1002/cyto.a.22251

  • Roederer M. Spectral compensation for flow cytometry: visualization artifacts, limitations, and caveats. Cytometry. 2001;45(3):194-205. doi: 10.1002/1097-0320(20011101)45:3<194::aid-cyto1163>3.0.co;2-c 

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1类激光产品。

仅供研究使用,不用于诊疗程序。