什么是蛋白质印迹法，工作原理如何？
蛋白质印迹（或免疫印迹）是一种用于检测、表征和定量蛋白质的技术。该过程首先涉及在聚丙烯酰胺凝胶上电泳分离蛋白质混合物，包括靶蛋白。并将分离后的蛋白质转移或吸附到硝化纤维素或PVDF膜上，以固定蛋白质。然后，使用合适的抗体，通过简单的抗原-抗体反应来检测靶蛋白。使用一级抗体结合特异性靶蛋白，然后使用二级抗体检测抗原-抗体复合物。靶蛋白显示为膜上的谱带。
蛋白质印迹应用
使用蛋白质印迹，可以从几个方面来表征蛋白质，包括蛋白存在与否、丰度、磷酸化状态或定位。除这些定性方面外，蛋白质印迹还可以用于基于试验样本和对照样本之间的谱带强度的蛋白质相对定量。
蛋白质印迹抗体
单克隆和多克隆抗体均适用于蛋白质印迹中的抗原免疫印迹。单克隆抗体来源于一个产生抗体的B细胞，而多克隆抗体来源于不同的B细胞，两者均具有识别特异性抗原的能力。虽然两者各有利弊，但当特异性非常关键时，首选单克隆抗体。与多克隆抗体相比，单克隆抗体具有高度特异性，且产生的结果更清晰、更可靠、更可重现。然而，单克隆抗体也更昂贵，并且在实验方案中对抗原的任何程序性修饰的耐受性更差。多克隆抗体的特异性相对较低，但可以提供更广泛的抗原识别，并且获得蛋白质定性信息的概率更高。
适用于蛋白质印迹的一级抗体、二级抗体和对照品
一级抗体通常识别特异性蛋白质或抗原表位，并与荧光染料或酶结合或进行标记，以进行后续检测。标记的抗体可直接检测（直接蛋白质印迹）或使用二级抗体检测（间接蛋白质印迹）。根据不同的方法，使用与酶或荧光团结合的抗体进行二级检测。辣根过氧化物酶（HRP）是最常见的标记用酶。
这些荧光团结合的抗体利用荧光团的特性吸收特定波长的光，并以不同的波长发射光。通过使用不同的滤光器组合，可以测量特定的光波长。由于可以获得吸收和发射最大值跨越整个光谱的荧光团，与不同波长的荧光团结合的抗体组合可用于检测多个蛋白质。市场上可买到靶向几种重要蛋白的标记抗体。
二级抗体有助于信号检测和扩增。二级抗体通常靶向产生一级抗体的物种IgG部分。因此，应考虑比较产生一级抗体的宿主物种与样本物种（例如，如果您的样本来自小鼠，则一级抗体不应来自小鼠，因为您的二级抗体可能靶向非特异性小鼠IgG）。
荧光和化学发光检测
基于荧光或化学发光的检测方法通常用于根据实验中使用的一级抗体检测抗原-抗体复合物。
在基于荧光的二级检测中，用荧光团结合的二级抗体结合一级抗体，并使用数字成像器检测信号。
在化学发光检测中，用与HRP结合的二级抗体结合一级抗体。这种方法采用放射自显影术或数字成像器进行信号检测。
标记抗体常用的荧光染料包括：
- 藻红蛋白（PE）
- 多甲藻黄素-叶绿素-蛋白质（PerCP）
- 异硫氰酸荧光素（FITC）
- 别藻蓝蛋白（APC）
比较蛋白质印迹与ELISA：有什么区别？
酶联免疫吸附检测法（ELISA）是另一种广泛用于蛋白质分析的免疫测定法。与蛋白质印迹一样，使用ELISA的蛋白质检测也使用与抗原结合的抗体，并且可以用一种抗体（直接ELISA）或使用一级和二级抗体（间接ELISA）来完成。ELISA还使用比色法或基于酶的方法进行检测。
与蛋白质印迹不同，ELISA是在微孔板上进行，微孔板上固定有特异性抗体。
使用蛋白质印迹获得的特异性远远高于ELISA。虽然ELISA可以在给定时间检测单个蛋白质，但采用蛋白质印迹，可以使用荧光团结合的抗体检测多个蛋白质。
BD Biosciences蛋白质印迹抗体、试剂和方案
BD Biosciences提供数千种纯化单克隆抗体和荧光团结合的二级抗体，这些抗体已经过蛋白质印迹测试和验证。包括几种HRP结合的抗体和对照细胞裂解液。
此外，我们还提供经验证的蛋白质印迹方案，以便为您提供支持。您还可以找到一些常见蛋白质印迹问题的答案。
使用BD Biosciences蛋白质印迹抗体生成的样本数据
仅供研究使用，不用于诊疗程序。
