PerCP-Cy5.5和BD Horizon Brilliant™ Blue 700（BB700）试剂的优效替代方案
BD Horizon RealBlue™ 705（RB705）试剂采用创新型激光特异性荧光染料，主要由488 nm蓝色激光激发，具备以下优势：
- 来自561 nm黄绿色激光的交叉激光激发极少
- 高亮度荧光染料，支持检测低表达的表面和胞内标志物
- 与BB700相比，背景更低，且无需额外清洗（不建议增加额外清洗步骤）
性能
BD Horizon RealBlue™ 705试剂的561 nm黄绿色激光交叉激发极少
RB705试剂可降低交叉激光激发
RB705、BB700与PerCP-Cy5.5荧光染料的标准化发射光谱。在BD FACSDiscover™ S8细胞分选仪上采集人CD4 SK3抗体。
与PerCP-Cy5.5和BB700相比，RB705是一种具有较高亮度的荧光染料，并且在对应的黄绿色检测器中的溢漏扩散更低
分别使用BD Horizon™ BB700试剂、PerCP-Cy5.5或RB705人CD4（克隆SK3）对人全血进行染色，在BD FACSymphony™ A5 SE流式细胞仪上进行采集，并使用FlowJo™软件进行补偿。请注意，溢漏扩散是试剂亮度与抗原密度的函数；在较高亮度下若观察到相似的溢漏扩散，则表明溢漏扩散更低。
应用
使用PerP-Cy5.5、BB700或BD Horizon™ RB705试剂（右图）的CD279（EH12.1）对人全血进行染色，并使用BD BV421试剂CD3（UCHT1，未显示）进行共染色；随后在BD FACSymphony™ A5 SE流式细胞仪上进行采集，并在FlowJo™软件中进行补偿。
在存在BD GolgiStop™蛋白质转运抑制剂的情况下，使用PMA和离子霉素对人外周血单个核细胞（PBMC）刺激5小时（顶图）或不刺激（底图），然后使用PerCP-Cy5.5、BB700或BD Horizon™ RB705试剂IFN-γ（克隆B27）以及匹配的同种型对照品进行染色。通过BD FACSymphony™ A5 SE流式细胞仪采集样本，并使用FlowJo™软件进行分析。
BD Horizon™ RB705试剂表现出稳定的性能，在备货型生产试剂和BD OptiBuild™按需生产试剂之间具有批间一致性。分别使用几个不同染料批次的RB705对人CD3（UCHT1，左图）或CD4（SK3，右图）对人全血进行染色，随后使用BD FACS™流式细胞分析用溶血素进行溶血处理。所有特异性检测均通过BD FACSymphony™ A5 SE流式细胞仪采集。
多色流式细胞术
在通过BD FACSLyric™流式细胞仪采集的12色T细胞抑制性Panel中，BD Horizon™ RB705试剂可用于进行有效解析
T细胞亚群的圈门方案
使用12色T细胞抑制性Panel对健康PBMC进行染色，并在BD FACSLyric™流式细胞仪上进行采集。每个图上方的标注显示了其来源的亲本细胞圈门方案；各象限中的数字表示细胞群的频率；T细胞亚群定义为：N，初始性；CM，中央记忆性；EM，效应记忆性；EMRA，效应记忆RA+性；SCM，干细胞样记忆性。
BD Horizon™ RB705试剂可用于解析低表达表面标志物
直方图叠加图展示了抑制性受体TIM-3、CTLA-4、TIGIT、BTLA、LAG-3和PD-1在CD8+ T细胞的初始性、干细胞样记忆性、中央记忆性、效应记忆性及效应记忆RA性亚群中的表达模式。
活化后的T细胞亚群
双变量图显示了在使用12色RB705 Panel进行免疫染色后，第3天活化T细胞中衍生的CD4/CD8 T细胞群。对照T细胞来自同一供体，在类似培养条件下培养，但未进行激活。通过3激光BD FACSLyric™流式细胞仪采集样本。
T细胞抑制性标志物在活化时上调
直方图叠加图展示了T细胞抑制性标志物的表达情况：CD4+静息T细胞（深灰色阴影）、CD4激活T细胞（深色）、CD8+静息T细胞（浅灰色）及CD8+激活T细胞（浅色），均使用12色RB705 Panel进行染色。
在通过BD FACSDiscover™ A5 SE流式细胞仪采集的17色光谱流式细胞术Panel中，BD Horizon™ RB705具有出色的分辨率
在激化T细胞中检测T细胞亚群的圈门策略
分离外周血单个核细胞并加入紫罗兰增殖染料450，然后使用或不用葡萄球菌肠毒素B（SEB，1 µg/mL）和CD28（1 µg/mL）刺激3天。在收集细胞进行染色前4小时，向“刺激+增强”组中加入PMA（10 ng/mL）和离子霉素（1 μg/mL）。然后使用可固定活性染料620和针对细胞表面标志物的抗体对细胞进行染色，再使用BD Cytofix/Cytoperm™固定/破膜缓冲液进行固定和破膜。随后使用细胞内抗体对固定和破膜后的细胞进行染色。在BD FACSymphony™ A5 SE流式细胞仪上对染色后的细胞进行分析。在排除粘连细胞、死细胞和谱系阳性细胞后用于检测T细胞亚群的圈门策略。选择CD3+ T细胞，并将其分为CD4+或CD8+细胞。根据CD25和CD69的表达，进一步评价CD8+ T细胞的活化阶段。通过BD FACSymphony™ A5 SE流式细胞仪采集样本，并使用FlowJo™软件进行分析。
CD8+ T细胞在不同活化水平下的抑制性受体表达
直方图叠加显示了刺激组CD8+ T细胞亚群上抑制性受体的表达。来自未刺激组的总CD8+ T细胞（顶部，深绿色）。
CD8+ T细胞在不同活化阶段的细胞因子表达
直方图叠加图显示了“刺激+增强”组中CD8+ T细胞亚群的细胞因子表达。来自未刺激组的总CD8+ T细胞（顶部，深绿色）。
17色光谱流式细胞术Panel的荧光染料标志物分配
| 特异性 | 克隆 | 荧光染料 | |
|---|---|---|---|
| UV 355 nm | CD25 | M-A251 | |
CD56 | NCAM16.2 | ||
CD20 | L27 | ||
CD19 | SJ25C1 | ||
CD16 | 3G8 | ||
CD14 | M5E2 | ||
AutoF | N/A | N/A | |
TIM-3 | 7D3 | ||
CD4 | SK3 | ||
| Violet 405 nm | TNF | MAb11 | |
VPD450 | N/A | N/A | |
CD3 | UCHT1 | ||
CD134 | ACT35 | ||
| Blue 488 nm | IFNγ | B27 | |
CD69 | FN50 | ||
FVS620 | N/A | N/A | |
LAG-3 | T47-530 | ||
PD-1 | EH12.1 | ||
II-2 | MQ1-17H12 | ||
| Yellow-Green 561 nm | CTLA-4 | BNI3 | |
| Red 640 nm | GranzB | GB11 | |
CD8 | SK1 |
通过BD FACSymphony™ A5 SE流式细胞仪采集的17色光谱流式细胞术Panel的荧光染料标志物分配。
缓冲液兼容性
BD Horizon RealBlue™ 705试剂可与多种固定系统和破膜系统广泛兼容
| 缓冲液 | 结果 |
| BD FACS™流式细胞分析用溶血素和BD Pharm Lyse™裂解缓冲液 | 兼容 |
| CellBox™ Blocking Buffer | Compatible |
| BD Cytofix™固定缓冲液 | 至少在24小时内稳定 |
| 1%多聚甲醛（PFA） | 至少在24小时内稳定 |
| BD Cytofix/Cytoperm™固定破膜剂 | 与固定前后抗体染色兼容 |
| BD FACS™破膜剂2 | 与固定前后抗体染色兼容 |
BD Phosflow™破膜缓冲液III | 与固定前后抗体染色兼容 |
| 与固定前后抗体染色兼容 | 兼容 |
| BD Horizon™ Brilliant染色缓冲液（BSB） | 兼容 |
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Brochures
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Poster
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Performance Guide and Chart
BD流式细胞仪是Ⅰ类激光产品。仅供研究使用，不用于诊断或治疗程序。
BD FACSLyric™流式细胞仪仅限科研使用，可配合BD FACSuite™应用程序实现最多12色检测。不用于诊断或治疗程序。
CF是Biotium, Inc.的商标，Cy是Global Life Sciences Solutions Germany GmbH或其附属公司Cytiva的商标。CellBlox为Thermo Fisher Scientific的商标。