用于高参数流式细胞术Panel和光谱流式细胞术Panel的高亮度荧光染料
BD Horizon RealBlue™ 744（RB744）试剂采用创新型激光特异性荧光染料，主要由488 nm蓝色激光激发，具备以下优势：
- 561 nm黄绿色激光的交叉激光激发极少
- 高亮度荧光染料，支持检测低表达的表面和胞内标志物
- 与适当配置的*传统流式细胞仪和光谱流式细胞仪兼容
*中心波长约为750 nm的滤光片，例如750/30
性能
BD Horizon RealBlue™ 744试剂的561 nm黄绿色激光交叉激发极少
RB744试剂的交叉激光激发极少
RB744的标准化发射光谱。在BD FACSDiscover™ S8细胞分选仪上采集人CD4 SK3抗体。
RB744是一种具有极高亮度的荧光染料，在RY743中的溢漏扩散极小
使用BD Horizon™ RB744人CD4试剂（克隆SK3）对人全血进行染色，在BD FACDiscover™ S8上进行采集，并使用FlowJo™软件与BUV737、BV750、RY743或R718（克隆SK3）进行解混。所示为单色叠加图。
应用
使用PE（左图）或BD Horizon™ RB744试剂（右图）CD25（2A3）对人全血进行染色，并使用APC CD4（SK3，数据未显示）进行共染色，然后在BD FACSymphony™ A5 SE流式细胞仪上进行采集和补偿。
在存在BD GolgiStop™蛋白质转运抑制剂的情况下，使用PMA和离子霉素对人外周血单个核细胞（PBMC）刺激5小时（顶图）或不刺激（底图），然后使用PerCP-Cy5.5、BB700或BD Horizon™ RB744试剂（克隆B27）以及匹配的同种型对照品进行染色。通过BD FACSymphony™ A5 SE流式细胞仪采集样本，并使用B710检测器分析信号。放大直方图以更好地显示IFN-γ阳性细胞。
BD Horizon™ RB744试剂表现出稳定的性能，在备货型生产试剂和BD OptiBuild™按需生产试剂之间具有批间一致性。分别使用几个不同染料批次的RB744对人CD3（UCHT1，左图）或CD4（SK3，右图）对人全血进行染色，随后使用BD FACS™流式细胞分析用溶血素进行溶血处理。所有特异性检测均通过BD FACSymphony™ A5 SE流式细胞仪采集。BD Horizon™和BD OptiBuild™试剂均在单独的实验中进行了测试。
多色流式细胞术
在通过BD FACSDiscover™ A5 SE流式细胞仪采集的17色光谱流式细胞术Panel中，BD Horizon™ RB744具有出色的分辨率
在活化T细胞中检测T细胞亚群的圈门策略
分离外周血单个核细胞并加入BD Horizon™紫罗兰增殖染料450，然后使用或不用葡萄球菌肠毒素B（SEB，1 µg/mL）和CD28（1 µg/mL）刺激3天。在收集细胞进行染色前4小时，向“刺激+增强”组中加入PMA（10 ng/mL）和离子霉素（1 μg/mL）。然后使用BD Horizon™可固定活性染料620和针对细胞表面标志物的抗体对细胞进行染色，再使用BD Cytofix/Cytoperm™固定/破膜缓冲液进行固定和破膜。随后使用细胞内抗体对固定和破膜后的细胞进行染色。在BD FACSymphony™ A5 SE流式细胞仪上对染色后的细胞进行分析。在排除粘连细胞、死细胞和谱系阳性细胞后，用于检测T细胞亚群的圈门策略如下：选择CD3+ T细胞并将其分为CD4+或CD8+细胞。根据CD25和CD69的表达，进一步评价CD8+ T细胞的活化阶段。通过BD FACSymphony™ A5 SE流式细胞仪采集样本，并使用FlowJo™软件进行分析。
CD8+ T细胞在不同活化水平下的抑制性受体表达
直方图叠加显示了刺激组CD8+ T细胞亚群上抑制性受体的表达。来自未刺激组的总CD8+ T细胞（顶部，深绿色）。
CD8+ T细胞在不同活化阶段的细胞因子表达
直方图叠加图显示了“刺激+增强”组中CD8+ T细胞亚群的细胞因子表达。来自未刺激组的总CD8+ T细胞（顶部，深绿色）。
17色光谱流式细胞术Panel的荧光染料标志物分配
| 特异性 | 克隆 | 荧光染料 | |
|---|---|---|---|
| UV 355 nm | CD25 | M-A251 | |
CD56 | NCAM16.2 | ||
CD20 | L27 | ||
CD19 | SJ25C1 | ||
CD16 | 3G8 | ||
CD14 | M5E2 | ||
AutoF | N/A | N/A | |
TIM-3 | 7D3 | ||
CD4 | SK3 | ||
| Violet 405 nm | TNF | MAb11 | |
VPD450 | N/A | N/A | |
CD3 | UCHT1 | ||
CD134 | ACT35 | ||
| Blue 488 nm | IFNγ | B27 | |
CD69 | FN50 | ||
FVS620 | N/A | N/A | |
LAG-3 | T47-530 | ||
PD-1 | EH12.1 | ||
II-2 | MQ1-17H12 | ||
| Yellow-Green 561 nm | CTLA-4 | BNI3 | |
| Red 640 nm | GranzB | GB11 | |
CD8 | SK1 |
通过BD FACSymphony™ A5 SE流式细胞仪采集的17色光谱流式细胞术Panel的荧光染料标志物分配。
缓冲液兼容性
BD Horizon RealBlue™ 744试剂可与多种固定系统和破膜系统广泛兼容
| 缓冲液 | 结果 |
| BD FACS™流式细胞分析用溶血素和BD Pharm Lyse™裂解缓冲液 | 兼容 |
| CellBlox™ Blocking Buffer | Compatible |
| BD Cytofix™固定缓冲液 | 至少在24小时内稳定 |
| 1%多聚甲醛（PFA） | 至少在24小时内稳定 |
| BD Cytofix/Cytoperm™固定破膜剂 | 与固定前后抗体染色兼容 |
| BD FACS™破膜剂2 | 与固定前后抗体染色兼容 |
| BD Phosflow™破膜缓冲液III | 与固定前后抗体染色兼容 |
| EDTA和肝素 | 兼容 |
| BD Horizon™ Brilliant染色缓冲液（BSB） | 兼容 |
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Brochures
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Poster
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Performance Guide and Chart
BD流式细胞仪是Ⅰ类激光产品。仅供研究使用，不用于诊断或治疗程序。
CF是Biotium, Inc.的商标，Cy是Global Life Sciences Solutions Germany GmbH或其附属公司Cytiva的商标。CellBlox为Thermo Fisher Scientific的商标。