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BD®コンペンセーションビーズ粒子は抗免疫グロブリン抗体でコーティングされていますので、ほとんどの蛍光結合抗体に結合することができ、代理の染色細胞となります。これらの粒子は使いやすく、それぞれの蛍光色素のピークを分解することで優れた結果を引き出します。しかしながら、どのようなビーズコントロールにも共通する制約として、ビーズコントロールは実際の染色細胞ではないため、蛍光漏れ込み値が、同様に染色した細胞とは異なる可能性があります。
BD®コンペンセーションビーズ粒子は種とκ鎖に特異的です。お客様のBD®コンペンセーションビーズ粒子が、使用される試薬の種と軽鎖のどちらにも対応していることを確認してください。当社はさまざまな種とサイズに対応したBD®コンペンセーションビーズ粒子（カタログNo. 552843、552844、552845、BD®コンペンセーションビーズプラス粒子、カタログNo. 560497、560499）を取り揃えています
いいえ、コンペンセーションコントロール試薬の発光スペクトル（蛍光漏れ込み率）が実験で使用する試薬と同一でなければなりません。たとえ類似する蛍光色素（FITC、Alexa Fluor™ 488、GFPなど）でも発光スペクトルが異なり、各色素の蛍光漏れ込み値に差が生じるおそれがあります。このことは、PI、7-AAD、BD Horizon™固定可能生死判別染色試薬などの生死判別色素にも当てはまります。
ロットが異なるタンデム色素で蛍光漏れ込み値に大きな差が生じる可能性があります。そのため、ロットごとにタンデム色素のコンペンセーションを行うことをお勧めします。実験で使用されるタンデム色素ごとにコンペンセーションコントロールをご用意いただく必要があります。
コンペンセーションコントロールは、サンプルを調製したときと同じ方法で処理することをお勧めします。具体的には、同じ日に調製する、同じ試薬を使用する（例： コンペンセーションコントロールに同じ透過処理緩衝液、BD Horizon™ブリリアント染色緩衝液［BSB］を使用する）、インキュベーション時間や保存時間を同じにする、などです。作製時期の異なるマトリックスには、同じ試薬を使用していても、サンプルのコンペンセーションに影響を及ぼす差が生じる可能性があります。
はい。色素間相互作用による染色アーチファクトを防ぐため、同じ実験でHorizon Brilliant™色素を2つ以上使用する場合は、必ずBD Horizon™ブリリアント染色緩衝液（BSB）を使用します。マルチカラー実験でBSBを使用する場合は、シングルカラーコンペンセーションコントロールチューブにもBSBを使用するのが最善です。この緩衝液はBD®コンペンセーションビーズ粒子に対応していますが、他社のコンペンセーションビーズとの試験は行われていません。
BD Horizon Brilliant™試薬を2個以上使用する場合は、BD Horizon™ブリリアント染色緩衝液か、BD Horizon™ブリリアント染色緩衝液プラスのいずれかを、マルチカラー免疫蛍光染色フローサイトメトリー解析に使用する必要があります。ヒト全血をBD Horizon Brilliant Violet™ 421（BV421）マウス抗ヒトCD4抗体とBD Horizon™ BV711マウス抗ヒトCD19抗体で染色しました。赤血球をBD FACS™溶解液（カタログNo. 349202）で溶解しました。CD19と比べて相関するCD4発現を示した2色フローサイトメトリーの等高線プロットは、無傷リンパ球が前方および側方光散乱特性を有するゲート化イベントから得られました。BD Horizon™ブリリアント染色緩衝液（カタログNo. 563794/566349、右のプロット）の存在下で細胞を染色すると、ブリリアント染色緩衝液の非存在下で細胞を染色したとき（左のプロット）と比べて、主要リンパ球集団の蛍光染色パターンが予測どおりに復元されます（点線）。フローサイトメトリー解析はBD LSRFortessa™細胞解析システムを用いて行いました。
コンペンセーション時は蛍光パラメータの電圧を維持しなければなりませんが、FSCやSSCは変えても構いません。これは、FCS/SSCプロット上で同じ位置にないコンペンセーションのために細胞とビーズを結合する際に特に有用です。
通常、細胞を用いてコンペンセーションを行う場合は、ユニバーサルネガティブを用いて陰性集団の蛍光を設定します。コンペンセーションコントロールとして染色シングルセルを含有するチューブ用に、細胞とビーズを結合する場合は、それぞれの蛍光ヒストグラム中の陰性集団の周囲にオートインターバルゲート（P3）を作成してください。これは多くの場合、7-AAD以外のすべての蛍光色素にビーズを使用する場合や、細胞を用いる場合の生死判別色素に当てはまります。
算出されたコンペンセーションは、ポジティブコンペンセーションコントロールの明るさにしか当てはまりません。コンペンセーションコントロールが測定限界を超えてしまう場合は、PMTVを調節するのではなく、コントロールに添加する抗体の量を漸減することを推奨します。
これらの色素は、BD®コンペンセーションビーズ粒子では最適なコンペンセーションは得られません。BD®コンペンセーションビーズ粒子を用いて算出したこれらの色素の蛍光漏れ込み値では、細胞の正確なコンペンセーションが行えない可能性があります。染色シングルセルコントロールであれば、より正確にコンペンセーションを行える可能性があります。
