适用于高参数与光谱流式细胞术 Panel、优于 PE-Cy7 的替代选择
BD Horizon RealYellow™ 775（RY775）试剂基于创新的、激光特异性的荧光染料开发，主要由 561-nm 黄绿激光激发，可提供：
- 相比 PE-Cy7 与 StarBright™ Yellow 800（SBY800）更低的交叉激发
- 明亮荧光，可用于检测低表达表面和细胞内标记物
- 相比 PE-Cy7 更低的非特异性单核细胞结合
Jump to a section
RY775 可用于高参数流式 Panel ，提高生物学分辨率
| 格式 | 激发峰 | 发射峰 | 光谱 | 传统 | 相对亮度 | Spillover* (1低，4高) | 替代 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| RY775 | 557 nm | 775 nm | ✓ | ✓ | 2 | PE-Cy7, StarBright™ Yellow 800 |
* 数值可能因仪器配置和设置而变化。溢出排名基于五激光光谱仪器的交叉激发，不包含对邻近探测器的溢出。
性能
BD Horizon RealYellow™ 775 试剂具有极高亮度，并降低溢出和单核细胞背景
RY775 的交叉激发显著低于 PE-Cy7
CD4（SK3）RY775、PE-Cy7 与 CD4（RPA-T4）StarBright™ Yellow 800（SBY800）的标准化发射谱。 数据采集于 BD FACSDiscover™ S8 细胞分选仪。
RY775 相比 PE-Cy7，在对应 紫外、紫、蓝与红激光通道中的交叉激发更低
人 PBMC 使用 CD4（SK3）RY775、PE-Cy7 或 StarBright™ Yellow 800 染色，在 BD FACSDiscover™ S8 上采集，并使用 FlowJo™ 进行光谱解混。
RY775 相比 PE-Cy7 具有更低的单核细胞背景
人全血分别使用 CD3（UCHT1）PE-Cy7 或 RY775 进行染色，随后采用 BD FACS™ Lysing Solution 进行溶血处理。所有样本均在 BD FACSymphony™ A5 SE 细胞分析仪上采集。
应用
BD Horizon™ RY775 解析低表达表面标记物
人全血使用 CD279（EH12.1）PE-Cy7（左）或 RY775（右）染色，并与 BUV395 CD3（UCHT1）共染。数据采集于 BD FACSymphony™ A5 SE，并进行补偿。
BD Horizon™ RY775 可解析细胞内标记物
BD Pharmingen™ HiCK-1 人类细胞因子阳性对照细胞（上图）或未刺激 PBMC（下图）经破膜后，分别使用 PE-Cy7 或 RY775 IFN-γ（B27）及相应同型对照染色。样本在 BD FACSymphony™ A5 SE 上采集。
RY775 在货架型试剂和 BD OptiBuild™ 现配试剂之间表现出批次一致性
BD Horizon™ RY775 在货架型试剂与 BD OptiBuild™ 现配试剂之间表现出稳定性能，并在不同染料批次之间保持良好一致性。实验中，人全血分别使用多个不同染料批次的 RY775-CD3（UCHT1，左图）或 RY775-CD4（SK3，右图）进行染色，随后以 BD FACS™ Lysing Solution 溶血处理。所有样本均在 BD FACSymphony™ A5 SE 细胞分析仪上采集；BD Horizon™ 与 BD OptiBuild™ 试剂的测试则分别在独立实验中完成。
多色流式细胞术
RY775 在 BD FACSDiscover™ S8 的 18 色光谱 Panel 中展现出色分辨率
RY775 与 BD Horizon RealBlue™ 780（RB780）在 18 色人免疫表型光谱 Panel 中协同表现出色
人外周血单个核细胞首先使用活性染料和针对细胞表面标记物的抗体进行染色。随后在 BD FACSDiscover™ S8 细胞分选仪上采集数据，并使用 FlowJo™ v10.10 软件进行分析。图中展示了排除死细胞与双ts事件后，用于解析 B 细胞以及 NK、T 细胞亚群的 gating 策略。
18 色光谱流式 Panel 的荧光染料分配表
| Specificity | Clone | Fluorochrome | |
|---|---|---|---|
| UV 349 nm | CD4 | SK3 | |
HLA-DR | G46-6 | ||
CD8 | RPA-T8 | ||
| Violet 405 nm | CCR7 | 2-L1-A | |
CD38 | HIT2 | ||
Live/dead | N/A | ||
CD14 | MφP9 | ||
| Blue 488 nm | CD57 | NK-1 | |
CD16 | 3G8 | ||
CD19 | SJ25C1 | ||
TCR γδ | 11F2 | ||
CD127 | A019D5 | ||
| Yellow-Green 561 nm | NKG2C | 134591 | |
CD3 | UCHT1 | ||
CD25 | 2A3 | ||
CD56 | B159 | ||
| Red 637 nm | Vδ2 TCR | 123R3 | |
CD45RA | HI100 |
此表格展示在 BD FACSDiscover™ S8 上采集的 18 色光谱 Panel 的荧光染料分配。
缓冲体系兼容性
BD Horizon RealYellow™ 775 试剂兼容多种固定破膜体系
| Buffers | Results |
| BD FACS™ Lysing Solution and BD Pharm Lyse™ Lysing Buffer | Compatible |
| BD Cytofix™ Fixation Buffer | Stable at least 24 hours |
| 1% PFA | Stable at least 24 hours |
| BD Cytofix/Cytoperm™ Fixation and Permeabilization Solution | Compatible with antibody staining before and after fixation |
| BD FACS™ Permeabilizing Solution 2 | Compatible with antibody staining before and after fixation |
| BD Phosflow™ Perm Buffer III | Compatible with antibody staining before and after fixation |
| EDTA and Heparin | Compatible |
| BD Horizon™ Brilliant Stain Buffer (BSB) | Compatible |
资源
Expand All
BD 流式细胞仪为 1 类激光产品，仅供科研使用，不用于诊断或治疗程序。
CF 为 Biotium, Inc. 商标；Cy 为 Cytiva 企业商标；CellBlox 为 Thermo Fisher Scientific 商标。