BD Horizon RealYellow™ 586（RY586）试剂基于一种创新的、激光特异性的荧光染料开发，主要由 561-nm 黄绿激光激发，能够提供：
- 来自 488-nm 蓝色激光的最小交叉激发
- 明亮的荧光染料，可支持低表达表面与细胞内标记物的检测
- 与 PE 相比显著更低的交叉激发
- 可作为传统流式细胞仪中 PE 的替代品
- 在同时配备 561-nm 黄绿激光与 488-nm 蓝色激光的光谱流式细胞仪上可与 PE 一起使用
RY586 试剂以最小的交叉激发提供高分辨率
| 格式 | 激发峰 | 发射峰 | 光谱 | 传统 | 相对亮度 | Spillover* (1低，4高) | 替代 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| RY586 | 565 nm | 586 nm | ✓ | ✓ | 1 | PE |
* 数值可能因仪器配置与设置不同而变化。溢出排名基于五激光光谱仪器上的交叉激发，不包含对相邻探测器的溢出。
性能
BD Horizon RealYellow™ 586 试剂与 PE 相比，在 488nm 蓝色激光下表现出最小的交叉激发
RY586 具有最小的交叉激发
RY586 与 PE 荧光染料的标准化发射谱。数据来自 BD FACSymphony™ A5 SE 细胞分析仪，使用 human CD4 SK3 抗体。
RY586 相比 PE，在部分紫激光与 UV 通道中产生更低的溢出扩散
人全血使用 BD Horizon™ RY586 CD4（SK3）试剂进行染色，并在 BD FACSymphony™ A5 SE 上采集与补偿。
与 PE 相比，RY586 在蓝激光多个探测器中的溢出扩散更低
人全血使用 BD Horizon™ RY586 CD4（SK3）试剂进行染色，并在 BD FACSymphony™ A5 SE 细胞分析仪上完成数据采集与补偿。为便于比较，将 PE 使用的双指数图同样应用于 RY586，从而更清晰地呈现其在特定通道中的扩散差异，
应用
人全血使用 RY586（左）或 PE（右，使用 561nm 黄绿激光采集）的 CD25（2A3）染色。数据采集于 BD FACSymphony™ A5 SE。
人 PBMC 使用 PMA 与 ionomycin 刺激，在加入 BD GolgiStop™ 5 小时后染色。染色组合为 APC CD4 + RY586（左，0.125 μg）或 PE（右，0.25 μg，黄绿激光采集）IL17α（N49653）。数据采集于 BD LSRFortessa™。
Molt4 细胞使用冰冷 70% 乙醇透化，然后分别使用 RY586（左）或 PE（右，黄绿激光采集）Ki67（B56）以及 DAPI 进行染色。数据采集于 BD LSRFortessa™ X20。
人 PBMC 同时使用 PE 与 BD Horizon™ RY586 试剂进行共染色。数据采集并在 BD FACSymphony™ A5 SE 上进行光谱解混。
BD Horizon™ RY586 试剂在货架型试剂与 BD OptiBuild™ 现配试剂之间表现出稳定性能，并在不同批次间保持良好一致性。左图显示：人全血分别使用多个不同染料批次的 RY586‑CD4（SK3）进行染色，随后采用 BD FACS™ Lysing Solution 溶血处理。右图显示：小鼠脾细胞使用不同染料批次的 RY586‑CD8a（53‑6.7）进行染色。所有特异性检测均在 BD FACSymphony™ A5 SE 细胞分析仪上完成。
多色流式细胞术
BD Horizon™ RY586 可在光谱流式细胞仪中与 PE 共同使用
RY586 与 PE 在多色光谱 Panel 中能够解析不同的细胞群
RY586 的亮度与 PE 相当，非常适用于低表达标记物的检测。在同一光谱 panel 中同时使用 RY586 和 PE，可进一步提升对低表达表面与细胞内标记物的高维度解析能力。
在本示例中，我们构建了一个同时包含 RY586 与 PE 的多色 panel，用于鉴定不同 CD16 表达水平的人免疫细胞。细胞均在 BD FACSymphony™ A5 SE 细胞分析仪上采集，并使用 FlowJo™ 软件进行分析；所用光谱解混矩阵包含 14 种荧光染料。
缓冲体系兼容性
BD Horizon RealYellow™ 586 试剂兼容多种固定破膜体系
| Buffers | Results |
| BD FACS™ Lysing Solution and BD Pharm Lyse™ Lysing Buffer | Compatible |
| CellBlox™ Blocking Buffer | Compatible |
| BD Cytofix™ Fixation Buffer | Stable at least 24 hours |
| 1% PFA | Stable at least 24 hours |
| BD Cytofix/Cytoperm™ Fixation and Permeabilization Solution | Compatible with antibody staining before and after fixation |
| BD FACS™ Permeabilizing Solution 2 | Compatible with antibody staining before and after fixation |
| BD Phosflow™ Perm Buffer III | Compatible with antibody staining before and after fixation |
| EDTA and Heparin | Compatible |
| BD Horizon™ Brilliant Stain Buffer (BSB) | Compatible |
"BD Horizon RealYellow™ 586 (RY586) Reagents look like the best alternative for PE and will simplify panel design on conventional flow cytometers. They can also be an additional dye for spectral panel design.”
Gert Van Isterdael, PhD
VIB Ghent University, Belgium
BD 流式细胞仪为 1 类激光产品。仅供科研使用，不用于诊断或治疗程序。
BD FACSLyric™ 流式细胞仪仅供科研使用，在 BD FACSuite™ 应用中支持至多 12 色。不用于诊断或治疗用途。
CF 为 Biotium, Inc. 的商标。Cy 为 Cytiva 旗下 Global Life Sciences Solutions Germany GmbH 或关联企业的商标。CellBlox 为 Thermo Fisher Scientific 的商标。