适用于高参数与光谱流式细胞术 Panel 的明亮选择
BD Horizon RealYellow™ 655（RY655）试剂基于创新的、激光特异性荧光染料开发，主要由 561-nm 黄绿激光激发，可提供：
- 极少的来自 488-nm 蓝色激光交叉激发
- 明亮的荧光，支持低表达表面与细胞内标记物检测
- 相比传统 PE 串联染料，降低的非特异性单核细胞结合
- 兼容适当配置*的传统与光谱流式细胞仪
*滤光片中心约为 660 nm（如 660/30 或 670/30）。注意：传统仪器上的 670/30 配置可能无法捕获最大信号，因此应将高抗原密度标记物分配到该通道。
RY655 可用于高参数流式 Panel，以提高生物学分辨率
| 格式 | 激发峰 | 发射峰 | 光谱 | 传统 | 相对亮度 | Spillover* (1低，4高) | 替代 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| RY655 | 557 nm | 654 nm | ✓ | ✓ | 3 | PE-Cy5, StarBright™ Yellow 665 |
* 数值可能因仪器配置与设置而变化。溢出排名基于五激光光谱仪器上的交叉激发，并不考虑对相邻探测器的溢出影响。
性能
BD Horizon RealYellow™ 655 试剂具有极高亮度，并降低溢出与单核细胞背景
RY655 相比 PE-Cy5 具有更低的交叉激发
CD4（SK3）RY655、PE-Cy5、NovaFluor™ Yellow 660（NFY660）、PE/Fire™ 640 以及 CD4（RPA-T4）StarBright™ Yellow 665（SBY665）的标准化发射谱。数据采集于 BD FACSDiscover™ S8 细胞分选仪。
RY655 相比 PE-Cy5 在 RB670 通道的扩散更低
PBMC 使用 CD4（SK3）RY655、RB670 或 PE-Cy5 进行染色。在 Cytek™ Aurora 光谱分析仪上采集并使用 FlowJo™（v10）进行光谱解混。单色染色图叠加显示。
RY655 相比 PE-Cy5 具有最小的单核细胞背景
人全血使用以下试剂染色：Mouse IgG1, κ 同型对照（RY655 为 X40；PE-Cy5 为 MOPC21）、CD3（UCHT1）、CD8（RPA-T8）或 CD16（3G8），并对 PE-Cy5 或 RY655 进行染色，然后使用 BD Pharm Lyse™ 溶血。样本通过 BD FACSymphony™ A5 SE 分析仪运行。
应用
人全血使用 CD279（EH12.1）RY655 及 CD3（UCHT1）FITC 染色，随后以 BD Pharm Lyse™ 溶血缓冲液溶血。在 BD FACSymphony™ A5 SE 上采集并使用 FlowJo™（v10）进行光谱解混。
A）刺激后的 PBMC 使用 BUV395 CD3（UCHT1）与 RY655 IFN-γ（B27）染色，流程遵循 Immunofluorescent Staining of Intracellular Cytokines for Flow Cytometric Analysis protocol
B) 人全血经 BD Phosflow™ Lyse/Fix Buffer 处理后，染色 RY655 Granzyme B（GB11）及 BV421 CD8（RPA-T8）。样本在 BD FACSymphony™ A5 SE 上采集，并用 FlowJo™（v10）进行光谱解混。
人全血染色抗 CD4 荧光染料，并使用 BD Pharm Lyse™ 溶血缓冲液溶血，随后计算相似性评分。单色染色图在 BD FACSymphony™ A5 SE 上采集并以 FlowJo™（v10）分析。
RY655 与 RB670 的标准化发射谱。PBMC 使用 human CD4（SK3）染色，并在 Cytek™ Aurora 上采集。
BD Horizon™ RY655 试剂在成品库存试剂与 BD OptiBuild™ 现配试剂之间表现出稳定性能，并在不同批次之间保持良好一致性。在实验中，人全血分别使用三批不同染料批次的 RY655-CD3（UCHT1，左图）或 RY655-CD4（SK3，右图）进行染色，随后采用 BD Pharm Lyse™ 溶血缓冲液进行溶血处理。所有样本均在 Cytek™ Aurora 光谱分析仪上采集，CD3 与 CD4 的实验在不同条件下独立完成。
多色流式细胞术
BD Horizon™ RY655 在 BD FACSDiscover™ S8 的 30 色光谱 Panel 中展现优异分辨率
BD Horizon RealYellow™ 与 RealBlue™ 系列试剂在 30 色光谱人类免疫表型 Panel 中协同表现出色。
人外周血单个核细胞先使用活性染料及针对细胞表面标记物的抗体染色，并加入 BD Horizon™ Brilliant Stain Buffer Plus。随后在 BD FACSDiscover™ S8 细胞分选仪上采集数据，并使用 FlowJo™（v10）软件进行分析。图中展示了用于免疫表型分析的 gating 策略，在排除死细胞与双ts事件后，可解析树突状细胞、单核细胞、B 细胞、NK 细胞亚群及 T 细胞亚群等群体。其中，CD95 RY655 可在 Gate 17 内有效识别稀有的浆母细胞群体。
30 色光谱流式 Panel 的荧光染料与标记物分配
| Specificity | Clone | Fluorochrome | |
|---|---|---|---|
| UV 349 nm | CD2 | RPA-2.10 | |
CD8 | RPA-T8 | ||
CD14 | 63D3.rMAb | ||
CD19 | HIB19 | ||
TCRγδ | 11F2 | ||
CD45 | HI30 | ||
| Violet 405 nm | CCR7 | 2-L1-A | |
CD45RA | HI100 | ||
Viability | N/A | ||
CD38 | HB7 | ||
CD123 | 9F5 | ||
CD161 | DX12 | ||
CD16 | 3G8 | ||
| Blue 488 nm | CD3 | UCHT1 | |
CD57 | NK-1 | ||
CD25 | 2A3 | ||
CX3CR1 | 2A9-1 | ||
PD-1 | EH12.1 | ||
CD127 | HIL-7R-M21 | ||
CD28 | CD28.2 | ||
| Yellow-Green 561 nm | KLRG1 | Z7-205.rMAb | |
CD4 | SK3 | ||
CD95 | DX2 | ||
TIM-3 | 7D3 | ||
CD11c | B-ly6 | ||
CD27 | M-T271 | ||
| Red 637 nm | CD56 | NCAM16.2 | |
CD20 | 2H7 | ||
TIGIT | TgMab-2 | ||
HLA-DR | G46-6 |
此表展示在 BD FACSDiscover™ S8 上运行的 30 色光谱 panel 的荧光染料配置。
缓冲体系兼容性
BD Horizon RealYellow™ 655 试剂兼容多种固定破膜体系
| Buffers | Results |
| BD FACS™ Lysing Solution and BD Pharm Lyse™ Lysing Buffer | Compatible |
| BD Cytofix™ Fixation Buffer | Stable at least 24 hours |
| 1% PFA | Stable at least 24 hours |
| BD Cytofix/Cytoperm™ Fixation and Permeabilization Solution | Compatible with antibody staining before and after fixation |
| BD FACS™ Permeabilizing Solution 2 | Compatible with antibody staining before and after fixation |
| BD Phosflow™ Perm Buffer III | Compatible with antibody staining before and after fixation |
| EDTA and Heparin | Compatible |
| BD Horizon™ Brilliant Stain Buffer (BSB) | Compatible |
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Brochures
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Poster
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Performance Guide and Chart
BD 流式细胞仪为 1 类激光产品。仅供科研使用，不用于诊断或治疗程序。
CF 为 Biotium, Inc. 商标。Cy 为 Cytiva 旗下企业商标。CellBlox 为 Thermo Fisher Scientific 商标。