明亮、干净的染料
BD Horizon RealYellow™ 610（RY610）试剂基于一种创新的、激光特异性的荧光染料开发，其主要由 561-nm 黄绿激光激发，可提供：
- 与 BD Horizon™ PE-CF594 和 PE-Dazzle™ 594 试剂相比，来自 488-nm 蓝色激光的交叉激发显著更低
- 与 BD Horizon™ PE-CF594 和 PE-Dazzle™ 594 试剂相比，来自 488-nm 蓝色激光的交叉激发显著更低
- 适用于配备相应探测器的传统与光谱流式细胞仪
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RY610 试剂可用于高参数流式 Panel，从而提高生物学分辨率
| 格式 | 激发峰 | 发射峰 | 光谱 | 传统 | 相对亮度 | Spillover* (1低，4高) | 替代 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| RY610 | 557 nm | 610 nm | ✓ | ✓ | 1 | PE-CF594, PE-Dazzle™ 594 |
* 数值可能因仪器配置和设置而变化。溢出排名基于五激光光谱仪器上的交叉激发，不包含对相邻探测器的溢出影响。
Performance
BD Horizon RealYellow™ 610 试剂在配备 561-nm 黄绿激光的流式仪中具有干净的发射谱与极低溢出
RY610 具有最小的交叉激发
RY610、PE-CF594 和 PE-Dazzle™ 594 荧光染料的标准化发射谱。使用 human CD4 SK3 抗体，在 BD FACSDiscover™ S8 细胞分选仪上采集。
RY610 试剂在相应的 紫外、紫光及蓝光探测器中具有极低的交叉激发
应用
BD Horizon™ RY610 试剂可解析中等表达水平的表面标记物
小鼠脾细胞分别使用 PE-CF594（左）或 BD Horizon™ RY610 Ly-6C（AL-21）（右）进行染色，并与 BUV395 CD8a（53-6.7）共同染色。样本在 BD FACSymphony™ A5 SE 细胞分析仪上采集并完成补偿。
BD Horizon™ RY610 试剂能够解析细胞内标记物
BD Pharmingen™ HiCK-1 人类细胞因子阳性对照细胞（上图）或未刺激的人 PBMC（下图）在破膜后，分别染色 BD Horizon™ PE-CF594 或 BD Horizon™ RY610（克隆 B27），并配套相应的同型对照。样本在 BD FACSymphony™ A5 SE 细胞分析仪上采集。直方图经过放大处理，以更清晰显示 IFN-γ 阳性群体。
RY610 在货架型试剂与 BD OptiBuild™ 现配试剂间表现出批次一致性
BD Horizon™ RY610 试剂在成品试剂与 BD OptiBuild™ 现配试剂之间均表现出稳定性能，并在不同批次间保持良好一致性。左图：人全血分别使用多个不同染料批次的 RY610-CD3（UCHT1）进行染色，随后以 BD FACS™ Lysing Solution 溶血。右图：人全血分别使用不同染料批次的 RY610-CD4（SK3）进行染色。所有样本均在 BD FACSymphony™ A5 SE 细胞分析仪上采集。BD Horizon™ 与 BD OptiBuild™ 试剂分别在独立实验中测试。
多色流式细胞术
BD Horizon™ RY610 试剂在 BD FACSDiscover™ S8 上的 22 色光谱 Panel 中展现优异分辨率
RY610 与 BD Horizon RealBlue™ 613（RB613）试剂在 22 色人类谱系光谱 Panel 中协同表现良好。
新鲜人外周全血样本首先使用针对细胞表面标记物的抗体进行染色，随后采用 BD Pharm Lyse™ 溶血缓冲液批量裂解红细胞。细胞随后在 BD FACSDiscover™ S8 细胞分选仪上采集，并使用 FlowJo™ v10.9 软件进行分析。图中展示了在排除双ts和 B 细胞后用于解析 NK 和 T 细胞亚群的 gating 策略。
22 色光谱流式 Panel 的荧光染料与标记物分配
| Specificity | Clone | Fluorochrome | |
|---|---|---|---|
| UV 349 nm | CD56 | R19-760 | |
AutoF | N/A | N/A | |
CD20 | L27 | ||
CD14 | M5E2 | ||
CD127 | HIL-7R-M21 | ||
IgD | IA6-2 | ||
| Violet 405 nm | IgM | G20-127 | |
CD38 | HIT2 | ||
CD8 | RPA-T8 | ||
IgG | G18-145 | ||
CD16 | 3G8 | ||
CD19 | SJ25C1 | ||
| Blue 488 nm | CD45 | HI30 | |
CD24 | ML5 | ||
CD25 | 2A3 | ||
CD123 | 7G3 | ||
TCR γδ | 11F2 | ||
BAFF-R (CD268) | 11C1 | ||
| Yellow-Green 561 nm | CD10 | HI10a | |
CD3 | UCHT1 | ||
| Red 637 nm | CD4 | SK3 | |
CD27 | M-T271 | ||
HLA-DR | L243 |
此表展示了在 BD FACSDiscover™ S8 上运行的 22 色光谱流式 Panel 的荧光染料选择。
缓冲体系兼容性
BD Horizon RealYellow™ 610 试剂兼容多种固定破膜体系
| Buffers | Results |
| BD FACS™ Lysing Solution and BD Pharm Lyse™ Lysing Buffer | Compatible |
| BD Cytofix™ Fixation Buffer | Stable at least 24 hours |
| 1% PFA | Stable at least 24 hours |
| BD Cytofix/Cytoperm™ Fixation and Permeabilization Solution | Compatible with antibody staining before and after fixation |
| BD FACS™ Permeabilizing Solution 2 | Compatible with antibody staining before and after fixation |
| BD Phosflow™ Perm Buffer III | Compatible with antibody staining before and after fixation |
| EDTA and Heparin | Compatible |
| BD Horizon™ Brilliant Stain Buffer (BSB) | Compatible |
资源
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BD 流式细胞仪为 1 类激光产品。仅供科研使用，不用于诊断或治疗程序。 CF 为 Biotium, Inc. 的商标。Cy 为 Cytiva 旗下 Global Life Sciences Solutions Germany GmbH 或其关联企业的商标。CellBlox 为 Thermo Fisher Scientific 的商标。