高参数和光谱流式 Panel 中优于 PE-Cy5.5 的替代选择
BD Horizon RealYellow™ 703（RY703）试剂基于一种创新的、激光特异性的荧光染料开发，主要由 561-nm 黄绿激光激发，提供：
- 相比 PE-Cy5.5 和 StarBright™ Yellow 720（SBY720）试剂更低的交叉激发
- 明亮的荧光，可支持低表达表面与细胞内标记物检测
- 非特异性单核细胞结合更低
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RY703 可用于高参数流式 Panel，从而提高生物分辨率
| 格式 | 激发峰 | 发射峰 | 光谱 | 传统 | 相对亮度 | Spillover* (1低，4高) | 替代 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| RY703 | 557 nm | 703 nm | ✓ | ✓ | 2 | PE-Cy5.5, StarBright™ Yellow 720 |
* 数值可能因仪器配置和设置而变化。溢出排名基于五激光光谱仪器的交叉激发，不包含对相邻探测器的溢出影响。
性能
BD Horizon RealYellow™ 703 试剂具有极高亮度，同时降低溢出与单核细胞背景
RY703 的交叉激发低于 PE-Cy5.5
CD4（SK3）RY703 与 PE-Cy5.5，以及 CD4（RPA-T4）StarBright™ Yellow 720（SBY720）荧光染料的标准化发射谱。数据采集于 BD FACSDiscover™ S8 细胞分选仪。
RY703 相比 PE-Cy5.5，在对应的 紫外、紫光、蓝光与红光检测器中的交叉激发更低
人 PBMC 使用 PE-Cy5.5 或 RY703 CD4（SK3）染色，并在 BD FACSymphony™ A5 SE 上采集与补偿。
RY703 相比 StarBright™ Yellow 720非特异性结合更低
人全血使用 human CD3（UCHT1）SBY720 或 RY703 染色，并使用 BD FACS™ Lysing Solution 溶血。样本在 BD FACSymphony™ A5 SE 上分析。
应用
BD Horizon™ RY703 试剂可解析低抗原密度表面标记物
小鼠脾细胞分别使用 Ly-6C（AL-21）StarBright™ Yellow 720（左）或 BD Horizon™ RY703（右）染色，并与 CD8a（53-6.7）BUV395 共染色。样本在 BD FACSymphony™ A5 SE 上采集并补偿。
BD Horizon™ RY703 试剂可解析细胞内标记物
人 PBMC 使用 BD Pharmingen™ 转录因子缓冲液套装固定破膜后，分别染色同型对照（左）或 FoxP3（259D/C7）RY703（右），并与 CD4（SK3）BUV395 共染色。样本在 BD FACSymphony™ A5 SE 上采集并使用 FlowJo™ 进行补偿。
RY703 在货架型试剂与 BD OptiBuild™ 现配试剂间表现出批次一致性
BD Horizon™ RY703 试剂在货架型试剂与 BD OptiBuild™ 现配试剂之间表现出稳定性能且批次一致性良好。实验中，人全血分别使用多个不同染料批次的 RY703-CD3（UCHT1，左图）或 RY703-CD4（SK3，右图）进行染色，随后采用 BD FACS™ Lysing Solution 进行溶血处理。所有样本均在 BD FACSymphony™ A5 SE 细胞分析仪上采集；BD Horizon™ 与 BD OptiBuild™ 试剂分别在独立实验中进行测试。
多色流式细胞术
RY703 在 BD FACSDiscover™ S8 的 18 色光谱 Panel 中展现优异分辨率
RY703 与 BD Horizon RealBlue™ 705（RB705）在 18 色光谱人类免疫表型 Panel 中协同表现出色
人 PBMC 使用活性染料及针对表面标记物的抗体染色。随后在 BD FACSDiscover™ S8 上采集，并使用 FlowJo™ v10.10 分析。图中展示了排除死细胞与双ts事件后，用于解析 B 细胞、NK 细胞亚群与 T 细胞亚群的 gating 策略。
18 色光谱 Panel 的荧光染料与标记物分配
| Specificity | Clone | Fluorochrome | |
|---|---|---|---|
| UV 349 nm | CD4 | SK3 | |
HLA-DR | G46-6 | ||
CD8 | RPA-T8 | ||
| Violet 405 nm | CCR7 | 2-L1-A | |
CD38 | HIT2 | ||
Live/dead | N/A | ||
CD14 | MφP9 | ||
| Blue 488 nm | CD57 | NK-1 | |
CD16 | 3G8 | ||
CD19 | SJ25C1 | ||
TCR γδ | 11F2 | ||
CD127 | A019D5 | ||
| Yellow-Green 561 nm | NKG2C | 134591 | |
CD3 | UCHT1 | ||
CD25 | 2A3 | ||
CD56 | B159 | ||
| Red 637 nm | Vδ2 TCR | 123R3 | |
CD45RA | HI100 |
此表展示在 BD FACSDiscover™ S8 上运行的 18 色光谱 panel 的荧光染料配置。
缓冲体系兼容性
BD Horizon RealYellow™ 703 试剂兼容多种固定破膜体系
| Buffers | Results |
| BD FACS™ Lysing Solution and BD Pharm Lyse™ Lysing Buffer | Compatible |
| BD Cytofix™ Fixation Buffer | Stable at least 24 hours |
| 1% PFA | Stable at least 24 hours |
| BD Cytofix/Cytoperm™ Fixation and Permeabilization Solution | Compatible with antibody staining before and after fixation |
| BD FACS™ Permeabilizing Solution 2 | Compatible with antibody staining before and after fixation |
| BD Phosflow™ Perm Buffer III | Compatible with antibody staining before and after fixation |
| EDTA and Heparin | Compatible |
| BD Horizon™ Brilliant Stain Buffer (BSB) | Compatible |
资源
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BD 流式细胞仪为 1 类激光产品。仅供科研使用，不用于诊断或治疗程序。
CF 为 Biotium, Inc. 商标。Cy 为 Cytiva 企业商标。CellBlox 为 Thermo Fisher Scientific 商标。