第4场比赛：细胞内染色
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在检测中评估细胞内标志物时，荧光染料的选择会对结果产生重大影响。并非所有荧光染料都适用于细胞内染色，因为有些荧光染料会受到用于固定和破膜细胞的缓冲液的影响。
在此次荧光染料大对决中，我们评估了由蓝色激光激发且发射波长约为610 nm的荧光染料。我们选择了几种不同的细胞内标志物进行评估，并将用三种不同的荧光染料对其进行染色。
（顶部）人外周血淋巴细胞中颗粒酶B表达的双色流式细胞术分析。使用BD Phosflow™ Lyse/Fix Buffer（货号558049）固定人全血。使用APC Mouse Anti-Human CD8, clone RPA-T8（货号561953）和BD Horizon™ RB613 Mouse Anti-Human Granzyme B, clone GB11（货号571117）、BD Horizon™ PE-CF594 Mouse Anti-Human Granzyme B, clone GB11（货号562462）或BioLegend PE/Dazzle™ 594 Mouse Anti-Human Granzyme B, clone QA18A28试剂在BD Perm/Wash™ Buffer（货号554723）中对细胞进行洗涤和染色。显示颗粒酶B与CD8相关表达的双变量伪色密度图源自具有完整淋巴细胞前向和侧向光散射特征的圈门事件。
（中间）经过刺激的人外周血淋巴细胞中IL-17A表达的双色流式细胞术分析。在存在BD GolgiStop™ Protein Transport Inhibitor (containing Monensin)（货号554724）的情况下，使用佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯（Sigma P-8139；50 ng/ml最终浓度）和离子霉素（Sigma I-0634；1 µg/ml最终浓度）刺激人外周血单核细胞5小时。收集细胞，然后使用BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS)（货号554656）进行洗涤，并使用BD Cytofix™ Fixation Buffer（货号554655）进行固定。洗涤细胞，然后使用APC Mouse Anti-Human CD4 SK3 antibody（货号555349）和BD Horizon™ RB613 Mouse Anti-Human IL-17A, clone N49-653（货号571130）或BioLegend PE/Dazzle™ 594 Mouse Anti-Human IL-17A, clone BL168试剂在BD Perm/Wash™ Buffer（货号554723）中进行破膜和染色。显示IL-17A与CD4相关表达的双变量伪色密度图源自具有完整淋巴细胞前向和侧向光散射特征的圈门事件。NA表示测试时我们无法进行特异性/格式组合。
（底部）增殖人MOLT-4细胞Ki-67表达的双色流式细胞术分析。对人MOLT-4（T淋巴细胞白血病，ATCC® CRL-1582™）细胞系中的增殖细胞进行破膜，并用70%冰冷乙醇固定。用BD Pharmingen™ Stain Buffer（货号554656）对细胞进行两次洗涤，用BD Horizon™ RB613 Mouse Anti-Ki-67, clone B56（货号571126）、BD Horizon™ PE-CF594 Mouse Anti-Ki-67, clone B56（货号567120）或BioLegend PE/Dazzle™ 594 Mouse Anti-Ki-67 , clone 11F6试剂进行染色，并用BD Pharmingen™ DAPI Solution（货号564907）进行复染，以染色DNA。显示DAPI染色与Ki-67相关表达的双变量伪色密度图源自具有MOLT-4细胞前向和侧向光散射特征的圈门事件。NA表示测试时我们无法进行特异性/格式组合。
冠军领奖区
由于所测试的所有三种染料在细胞内染色方面均表现出色，因此我们将其评为并列冠军！需要注意的是，截至2024年7月26日，StarBright™和NovaFluor™染料偶联抗体目前仅针对细胞表面标志物，尚未与细胞内标志物偶联。因此，未将其纳入本次荧光染料大对决。
*专业提示* 除了荧光染料灵敏度以外，不同的克隆也会受到不同破膜方案处理的不同影响，因此必须确保您使用的抗体克隆能够承受这些方案。
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结果将会于10月25日星期五公布
免责声明: 荧光染料大对决中显示的结果和结论均基于在特定条件下进行的实验。用户应根据自己的具体方案对试剂进行评估，因为结果可能因不同的实验条件而异。
碧迪流式细胞仪是Ⅰ类激光产品。仅供研究使用，不可用于诊断或治疗程序。
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