BD OMICS-One免疫分析蛋白Panel

BD OMICS-One免疫分析蛋白Panel与新鲜配制的BD AbSeq抗体混合物在性能上表现一致。从全血分离后，将外周血单个核细胞（PBMC）分成静息组（未处理）和活化组（用CD3/CD28处理24小时）。将静息细胞和活化细胞以1:1的比例混合，用BD OMICS-One免疫分析蛋白Panel或新鲜制备的具有相同AbSeq特异性的混合物进行染色。然后将相等数量的细胞加到BD Rhapsody检测试剂盒上，生成AbSeq和WTA文库并测序（本研究n=2个单独实验）。采用SeqGeq软件进行数据分析。

A. UMAP显示，BD OMICS-One免疫分析蛋白Panel与新鲜合并的BD AbSeq抗体染色样本之间识别的细胞组具有强烈的重叠性。

B. BD OMICS-One免疫分析蛋白Panel与新鲜BD AbSeq抗体混合物检测到的AbSeq总数表现出高度相关性，R2大于0.98。

BD OMICS-One免疫分析蛋白Panel中包含的所有30种AbSeq特异性的性能。PBMC经激活并按照上图所示方法进行样本制备。染色后，在BD Rhapsody系统上捕获细胞，生成AbSeq和WTA文库并测序。为了使测序饱和度超过80%，使用Illumina NextSeq高通量试剂盒对文库进行测序，WTA为20,000 reads/细胞，AbSeq为30,000 reads/细胞。采用SeqGeq软件进行数据分析。我们在至少两位不同供者的样本中重复了上述实验。此处展示的是一位供者的代表性图示。

A. 使用BD OMICS-One免疫分析蛋白Panel抗体与WTA mRNA表达谱，对静息与激活PBMC样本进行UMAP降维后的细胞注释图。

B. 基于（A）的UMAP显示BD OMICS-One免疫分析蛋白Panel中各个AbSeq克隆的热图，展示每个AbSeq的检测特异性在不同细胞类型中的分布情况。

BD OMICS-One免疫分析蛋白Panel是一种灵活的基础Panel，可兼容添加其他AbSeq特异性。在本研究中，向复溶后的BD OMICS-One免疫分析蛋白Panel冻干球中加入并混合了三种BD AbSeq抗体（n=2）

A. 实验结果显示，即使补充添加额外抗体，BD OMICS-One 免疫分析蛋白Panel的性能也未受到影响，表现为极高的相关性（R2>0.99）。

B. 利用UMAP图展示了BD OMICS-One免疫分析蛋白Panel中的CD8（SK1）和CD45RA（上排）与补充添加抗体CD8［RPA-T8］、CD45RO和CD38（下排）的特异性检测结果。CD38 的补充添加检测出了预期为CD38阳性的细胞类型。CD8（RPA-T8）补充添加克隆的染色图谱与BD OMICS-One免疫分析蛋白Panel中的克隆（SK1）高度相似，表明该补充添加抗体具有高度特异性，并且两个针对同一抗原的克隆具有良好兼容性。CD45RO（补充添加）与CD45RA（BD OMICS-One免疫分析蛋白Panel）形成对比的表达模式，进一步证实将AbSeq特异性补充添加至BD OMICS-One免疫分析蛋白Panel不会对实验结果产生不良影响。

BD OMICS-One免疫分析蛋白Panel专为与RNA检测及多样本检测试剂盒协同工作而设计。

A. 从BD OMICS-One免疫分析蛋白Panel染色的细胞（静息PBMC和活化PBMC的1:1混合物）生成WTA和AbSeq文库并测序。为了展示多组学分析的优势，我们分别对仅使用WTA数据（mRNA分析）和联合使用WTA+AbSeq数据（mRNA与蛋白质分析）进行了分析比较。左侧显示仅使用WTA（mRNA）数据的UMAP坐标和无偏聚类（phenograph），而右侧显示使用WTA+AbSeq（mRNA和蛋白）数据的坐标和注释。通过多组学方法，揭示了更多的细胞类型，从而带来了更深入的生物学见解。

B. 为了测试BD单细胞多样本检测试剂盒（SMK）和BD OMICS-One免疫分析蛋白Panel的兼容性，我们使用SMK和BD OMICS-One免疫分析蛋白Panel一起进行细胞染色，并生成WTA、AbSeq和SMK文库进行测序。然后将BD OMICS-One免疫分析蛋白Panel中标记物的表达与无SMK情况下生成的数据进行比较。这些数据表明，添加SMK不会影响BD OMICS-One免疫分析蛋白Panel，BD OMICS-One免疫分析蛋白Panel+WTA与BD OMICS-One免疫分析蛋白Panel+WTA+SMK之间的高相关性（R2>0.99）证明了这一点。