BD® CompBeads补偿微珠套件含聚苯乙烯微珠，用于多色流式细胞仪分析的荧光补偿设置。BD® CompBeads补偿微珠套件含聚苯乙烯微珠，用于多色流式细胞仪分析的荧光补偿设置。BD® CompBeads补偿微珠套件提供了两种微珠，一种能结合所有带κ轻链的免疫球蛋白且具有种系特异性的免疫球蛋白κ微珠，另一种是没有结合能力的阴性对照微珠。如果BD® CompBeads补偿微珠与偶联了荧光色素的大鼠抗体混合，可提供迥异的阳性和阴性（背景荧光）染色（抗体）种群，这些染色的种群可用于人工设置补偿水平或通过仪器设置软件自动设置补偿水平。由于补偿调整时用的是将在实验中用到的同一种荧光色素标记抗体（见技术数据表），该方法可让您对任何荧光色素标记抗体的组合所致光谱重叠进行补偿校正，无需使用价格不菲的组织样本或硬染色珠，后者具有潜在不匹配的荧光光谱。
我们强烈推荐采用BD® CompBeads补偿微珠进行串联染料（即PE-Cy7, APC-Cy7等）偶联物的实验，这些染料偶联物每种都有明显的光谱特征。
抗小鼠、抗大鼠、抗大鼠/仓鼠免疫球蛋白、 κ/阴性对照补偿微珠套件的使用规程l
- 使用前用涡流彻底搅拌BD® CompBeads微珠。
- 对既定实验用的每批荧光色素标记的大鼠免疫球蛋白κ抗体，均标记一个独立的12 × 75 mm的试管。
- 在每个试管中加入100 µL的染色缓冲液（例如，货号为554656的BD Pharmingen™染色缓冲液（FBS） 或货号为554657的BD Pharmingen™染色缓冲液（BSA)。
- CompBeads（抗小鼠、抗大鼠或抗大鼠/仓鼠）免疫球蛋白κ微珠，然后用涡流搅拌。
- 对每个实验，对于每个要测试的预稀释抗体库（或稀释到适合对106个细胞进行染色的最佳浓度的批量抗体），取20µL加入到适当标记的试管中。（确保抗体沉积到微珠混合物中，然后用涡流搅拌。）
- 室温下培养15-30分钟。避免直接暴露在光线下。
- 在微珠和抗体培养过程中，利用该实验的靶组织（如全血、脾细胞等）设置流式细胞仪的PMT电压。如果您不确定，请使用BD® CompBeads阴性对照微珠作为阴性参考点，然后继续。
- 按照培养的步骤（见上文第6步），在每个试管和颗粒团中加入2ml染色缓冲液，以200 G的速度离心10分钟。
- 用细尖头巴斯德吸管小心抽吸掉每个试管中的上清液。
- 在每个试管中加入0.5 mL染色缓冲液，使微珠颗粒团重新悬浮起来。用涡流彻底搅拌。
- 在流式细胞仪上分别对每个试管进行测试。根据FSC（前向光散射）和SSC（侧向光散射）特性的选通单态微珠群。
- 如有可能，将流量调整到每秒200-300个事件。
- 为所给荧光色素偶联抗体创建相应的点阵图。
- l放置一个象限门，使阴性微珠群在左下象限，阳性微珠群在右上或右下象限。调整补偿值，直到每个微珠群的中位荧光强度（MFI） （如象限的统计窗口所示）大致相等。
- 如有必要，对其它试管重复步骤13和14。
- 继续获取实际染色的实验。
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仅供科研使用。不得用于诊断或治疗。