Skip to main content Skip to navigation

用于同时测量多种生物标志物的新型多重流式代理分析测定


将蛋白质生物标志物分析与单细胞水平的全基因组表达谱相结合时,可以提供比以往更深入的科学见解。尽管CITE-Seq(转录组和表位的细胞标签测序)已得到广泛采用,但仍需对实现该组合的技术进行标准化和简化,以帮助克服其中的一些挑战,例如在进行整个CITE-Seq检测之前,缺少检测抗体结合以报告生物标志物表达的质量检查。

 

单细胞多组学方案通常包括使用荧光激活细胞分选(FACS)特异性分离出感兴趣细胞群,然后使用该细胞群同时进行基因(RNA-Seq)和蛋白质表达(CITE-Seq)的单细胞测序。在该方案中,需要使用与用于流式细胞术分析及分选的荧光染料和用于CITE-Seq的寡核苷酸偶联的抗体对细胞进行共染色。这意味着,除了前面提到的寡核苷酸偶联抗体结合不确定的问题外,该程序还存在抗体竞争和最终损害报告信号强度的风险。

 

Shi等人在近期的一份出版物中解决了这些问题,并提供了一个易于使用的工作流程,即使用一组与用于CITE-Seq检测的特异性抗体衍生标签(ADT)互补的精选荧光染料-寡核苷酸偶联物。该策略称为流式代理分析测定,因为它可以在单细胞捕获、文库制备和测序工作流程之前使用流式细胞术确认ADT与细胞的结合。作为原理验证,作者将该方法应用于单一ADT标志物检测到10个标志物多重检测方法的不同实验场景,同时评价多个生物标志物。作者还证明,该策略适用于依次使用染料-寡核苷酸偶联物的5个标志物panel、荧光激活细胞分选和CITE-Seq对自然杀伤(NK)细胞和T细胞进行选择性分选。

Flow Proxy Assay Graphic


在所使用的技术和材料中,BD FACSymphony™ A5或BD FACSymphony™ A5 SE流式细胞仪分别用于常规或光谱流式细胞术分析。BD FACSAria™ II细胞分选仪用于FACS。需要使用多种抗体和染料,包括即用型商用形式、定制偶联物和一些较新的BD Horizon RealYellow™ 和BD Horizon RealBlue™ 染料。FlowJo™ 软件v10.8.1用于流式细胞术数据的可视化和分析。基于微孔的BD Rhapsody™ 单细胞分析系统BD Rhapsody™ 靶向mRNA试剂盒BD® AbSeq抗体-寡核苷酸偶联物物BD®单细胞多样本检测试剂盒用于多组学单细胞分析工作流程。

 

在该出版物中,作者介绍了一种基于流式细胞术的检测方法,可帮助用户在单细胞捕获、文库制备和测序工作流程之前,使用抗体衍生标签(ADT)检查CITE-Seq的蛋白质标志物表达。考虑到所展示的不同场景,为ADT panel选择标志物时,流式代理分析测定可用作有效的质量控制方法,也是需要先进行荧光激活细胞分选再进行CITE-Seq的实验策略的可行选择。

Flow点击了解 “使用抗体衍生标签和CITE-Seq对蛋白质表达进行流式细胞术分析”全文

    

    

碧迪医疗流式细胞仪是1类激光产品;

仅供研究使用,不用于诊断或治疗程序。