第5场比赛：缓冲液兼容性
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在确定要在流式细胞术Panel中研究的标志物以及使用的方案后，您需要确定与将使用的染色、固定和破膜缓冲液兼容的荧光染料。
如果您有兴趣研究细胞内的标志物，可能需要对细胞进行处理，使这些抗原能够接触染色试剂。无论是研究细胞质还是细胞核中的标志物，都可能需要使用不同的缓冲液进行固定和破膜。因此，了解不同缓冲液对标志物染色模式及生物学分辨率数据的影响便显得尤为重要。
用BD Horizon™ RY610 Mouse Anti-Human CD3 UCHT1（货号571134）、BD Horizon™ PE-CF594 Mouse Anti-Human CD3 UCHT1（货号562280）、Thermo Fisher NovaFluor™ Yellow 610 Mouse Anti-Human CD3 UCHT1、Bio-Rad StarBright™ Yellow 605 Mouse Anti-Human CD3 UCHT1或Thermo Fisher PE-eFluor™ 610 Mouse Anti-Human CD3 UCHT1试剂对新鲜分离人PBMC染色30分钟。然后用BD Pharmingen™ Stain Buffer（货号554656）对染色的PBMC进行两次洗涤（蓝色直方图）。对于经过处理的细胞（红色直方图），用BD Pharmingen™ Stain Buffer洗涤两次后，使用BD Cytofix™ Fixation Buffer（货号554655）固定细胞，并使用BD Phosflow™ Perm Buffer III（货号558050）在冰上破膜30分钟。随后用BD Pharmingen™ Stain Buffer洗涤细胞两次。直方图源自基于淋巴细胞光散射特征的圈门事件。使用BD FACSymphony™ A5 SE流式细胞分析仪和FlowJo™软件进行流式细胞术分析和数据分析。.
冠军领奖区
您可以通过比较未处理样本（蓝色）和经过固定-破膜处理的样本（红色）的染色谱，判断您使用的缓冲液是否影响了生物学分辨率数据。从以上数据可以看出，在本实验中使用的荧光染料会产生不同的影响，RY610和StarBright™ Yellow 605几乎未产生影响，而PE-CF594和PE-eFluor™ 610则会显著降低信号。
*专业提示* 需要注意的是，PE串联染料通常更易受到严苛染色条件的影响。
亚军:
NFY610
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结果将会于10月25日星期五公布
免责声明: 荧光染料大对决中显示的结果和结论均基于在特定条件下进行的实验。用户应根据自己的具体方案对试剂进行评估，因为结果可能因不同的实验条件而异。
碧迪流式细胞仪是Ⅰ类激光产品。仅供研究使用，不可用于诊断或治疗程序。
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