immunoassays란 무엇이며 어떤 용도로 사용됩니까?
Immunoassay(면역분석법)는 cytokines, chemokines, growth factor 및 기타 protein과 같은 분석물 검출 및 정량화를 위해 antigen-antibody chemistry 및 이들의 상호작용을 활용하는 분석 방법입니다. Radio-immunoassay (RIAs) 와 enzyme-linked immunosorbent assay (ELISAs)는 가장 일반적으로 사용되는 Immunoassay입니다. ELISA는 뛰어난 민감성, 특수성 및 정밀도로 인해 면역 분석 분석법의 gold standard로 인정받고 있습니다. Enyzme-linked immunosorbent spot (ELISPOT)은 특정 항체 분비 세포를 분석하기 위한 또 다른 강력한 면역 분석법입니다. 최근에 capture bead–based immunoassay는 다양한 분석물 측정에 민감한 옵션을 제공하고 다른 검사법에 비해 대규모로 multiplex 검사를 할 수 있는 기능을 제공합니다.
BD Biosciences는 cytokine 및 chemokine 정량을 위한 분석 플랫폼을 제공합니다.
- multiplex detection 과 analysis을 위한 BD® CBA solution
- routine ELISA research application을 위한 BD OptEIA™ Kits and Sets
- cytokine 생성 빈도를 측정하기 위한 BD® ELISPOT Assays
Tools and Techniques for Cytokine Quantitation
| Tool/Technology | BD® Cytometric Bead Array (CBA) | ELISA | ELISPOT |
|---|---|---|---|
| Molecules detected | Secreted or intracellular | Secreted | Secreted (in situ) |
| Multiparameter | Yes | No | No |
| Single-cell / cell-subset information | No | No | Frequencies, no subset information |
| Antigen-specific | Yes | Yes | Yes |
| Post-assay viability | Yes | Yes | No |
| Protein quantitation | Yes | Yes | No |
| Instrumentation | Flow cytometer | Spectro-photometer | ELISPOT reader |
Bead-based immunoassays
Bead-based assay는 형광 항체와의 결합을 위해 plate 대신 형광 바코드 비드를 사용하고 유세포 분석 방법을 사용하여 분석하는 것입니다. Bead-based immunoassay를 통해 일반적인 ELISA 검사법을 이용하는 것보다 더 높은 민감도로 multiplex 검출이 가능하기 때문에 연구에 필요한 시간과 sample을 절약할 수 있습니다.
BD® Cytometric Bead Arrays (CBA) 소개
CBA assays는 cytokine, chemokine, growth factor 및 phosphorylated signaling protein을 포함하여 다양한 수용성 및 세포 내 단백질 검출을 위해 형광 항체를 사용하는 bead-based immunoassay입니다.
Array내의 capture bead는 고유환 형광 강도를 가지며 단일 분석물에 특정한 capture antibody 로 coating됩니다. 서로 다른 bead의 조합이 시료 또는 standard 및 reporter molecule (PE)에 결합된 detection antibody 혼합물과 혼합됩니다. 배양 및 세척 후 유세포 분석기에서 sample를 획득합니다.
BD® CBA 솔루션은 유연성을 높이기 위해 관심있는 protein이나 antibody를 추가할 수 있는 능력을 제공한다.
BD® CBA Functional Beads는 특정 요구사항에 대한 관심 대상 antibody 또는 protein을 접합하는데 사용할 수 있습니다. 접합 과정은 ulfo-SMCC chemistry를 이용하며 BD® CBA Functional Bead Conjugation Buffer Kit에 있는 완충제와 함께 일반 실험실 소모품을 사용하여 4시간 미만으로 수행합니다. 이는 기존의 ELISA를BD® CBA Flex Set Assays 포트폴리오와 혼합할 수 있는 bead-based immunoassay로 전환하기 위한 이상적인 플랫폼입니다. 여러 bead 위치를 지정할 수 있기 때문에 새로운 multiplex panel을 만들 수 있으며 단일 반응으로 최대 1,000개의 테스트를 준비할 수 있기 때문에 많은 테스트 간에 일관성을 보장합니다.
BD® CBA 솔루션은 사전 구성된 키트 또는 고유한 요구사항에 맞게 구성 가능한 개방형 형식으로 제공됩니다.
BD® CBA 솔루션을 이용하여 생성된 sample data
NIBSC conversion factor 요약에 관한 내용은 BD® CBA standards와 NIBSC/WHO international standards의 비교를 참조하십시오.
BD® CBA Kit
Representative standard curves (IL-12p70 and TNF).
Representative standard curves (IL-10 and IL-6).
Representative standard curves (IL-1β and IL-8).
BD® CBA Enhanced Sensitivity Kits
Comparison of BD CBA Flex Set vs BD CBA Enhanced Sensitivity Flex Sets.
Comparison of BD CBA Flex Set vs BD CBA Enhanced Sensitivity Flex Sets 2
NIBSC conversion factor 요약에 관한 내용은 BD® CBA standards와 NIBSC/WHO international standards의 비교를 참조하십시오.
ELISA Immunoassay
ELISA immunoassays 또는 enzyme immunoassays (EIA)은 특정 항원 항체 결합 및 효소반응을 이용하여 다양한 면역세포에서 생성되는 protein, peptide 및 signaling molecule을 검출하고 측정합니다. 이 기법에서 special ELISA microplate는 목표 항원이나 항체 또는 둘 모두를 고정시키는데 사용합니다. 이후 high-affinity antibody와의 배양은 검출 가능한 신호를 생성하며, colorimetric 또는 enzyme-based method를 이용해서 측정 가능합니다.
사용하는 detection strategy에 따라 여러가지 ELISA 기법을 이용할 수 있습니다. 가장 일반적인 유형은 antigen을 결합하기 위해 ELISA microplate에 부착된 capture antibody를 사용하는 sandwich immunoassay 형식입니다. second primary antibody는 antigen을 묶는 데 사용됩니다. 따라서 antigen은 capture antibody와 primary antibody사이에 sandwich 구조로 끼어 있게 된다. 이후 신호 증폭 및 검출을 위해 primary antibody에 특이적으로 결합하는 biotinylated secondary antibody를 사용합니다.
BD Biosciences는 혈청, 혈장 및 조직배양 상층액에서 수용성 단백질의 편리한 정량을 위한 sandwich ELISA kits and set를 제공합니다.
ELISA 프로토콜
BD® ELISA reagent offerings
ELISPOT Immunoassay
ELISPOT assay는 antigen-specific T세포를 분석하고 T 세포의 기능을 모니터링 하는데 사용됩니다. 이는 체외에서 특정 protein을 분비하는 개별 세포를 탐지하고 분석하는 강력한 도구입니다. 본래 특정 antibody 분비 세포를 분석하기 위해 개발되었지만, 이 분석은 cytokine과 같은 다양한 다른 effector molecule를 생성하고 분비하는 세포 빈도를 측정하는데 적용되었습니다. ELISPOT은 매우 정량적인 분석입니다.
Sandwich ELISA와 마찬가지로 ELISPOT은 microplate well을 이용하여 capture antibody를 부착합니다. Microplate는 배양세포를 성장시키는데 사용되며 이러한 배양 세포는 이후 cytokine을 분비하도록 자극됩니다. 분비된 protein은 surface antibody와 결합합니다. 그리고 적절한 secondary antibody 를 사용하여 신호를 증폭하고 검출합니다.
BD Biosciences는 여러가지 ELISPOT assay 포맷을 제공합니다. BD® ELISPOT는 single cell 수준에서 cytokine 방출을 검출하여 cytokine을 생성하는 cell frequency를 측정할 수 있습니다. BD® ELISPOT Assay는 ELISA 및 세포 내 염색보다 더 민감도가 높은 것으로 나타났습니다.
연구용입니다. 진단용 또는 치료용으로 사용할 수 없습니다.