세포 기반 assay는 증식, 생존력, 세포 사멸 및 조절 네트워크와 같은 세포 과정과 인산화 및 cytokine 분비와 같은 세포의 기능적 측면을 측정합니다. 세포 기반 분석을 사용하여 관심있는 전체 경로를 조사하고 여러 단계를 측정하여 실제로 세포 내부에서 일어나는 일에 대한 기능적 판독 값을 산출할 수 있습니다. BD Biosciences는 세포 내 cytokine 신호 전달, 세포주기, 세포 생존력 및 증식 측정 및 인산화 이벤트 평가에 대한 여러 분석을 제공합니다.
세포주기, 증식, 생존력 및 세포사멸 분석
진핵 세포의 세포 성장, 복제 및 분열은 세포주기 라고하는 고도로 통제된 일련의 사건에 따라 발생합니다. 적응 면역에서 특정 T 및 B 림프구는 외래 항원 자극에 반응하여 클론 확장 (분할, 증식 및 분화)을 겪습니다. Flow cytometry, immunofluorescence 또는 immunohistochemistry를 사용하여 세포주기 상태를 신속하게 결정하고, 자극에 대한 세포 반응을 결정할 수 있습니다.
세포주기 및 세포 DNA content 분석
BD Biosciences는 세포주기를 연구하기 위한 다양한 시약을 제공합니다. 시약에는 PI (propidium iodide) 및 7-aminoactinomycin D (7-AAD)와 같은 핵산 염료가 포함됩니다. 또한 BD Cycletest ™ Plus Reagent Kit에는 단백질을 분해하는 PI 및 기타 시약과 RNA가 포함되어 있어 보다 정확한 DNA 측정이 가능합니다. 이후 샘플은 유세포 분석을 사용하여 분석되어 배수성을 평가하고, 비정상적인 DNA 스템 라인을 식별하고, DNA 인덱스 (DI) 및 줄기 라인의 세포주기 단계 분포를 추정합니다. 세포주기 단계에서 DNA 수준이 변경되어 7-AAD와 같은 DNA 염료를 사용하여 특징적인 세포 DNA content 프로필을 생성할 수 있습니다 (그림 참조).
세포가 세포주기의 단계를 거치면서 히스톤 H3 Ser28과 같은 단백질이 변형되거나 발현이 변경됩니다. DNA 복제를 용이하게하기 위해 히스톤이 수정되어 복제 기계가 들어갈 수 있도록 염색질이 열립니다. 세포주기 연구를 더욱 지원하기 위해 BD Biosciences는 이러한 단백질에 대한 항체를 전달하여 이미징 또는 유세포 분석 애플리케이션에 사용합니다.
혼입된 브로모데옥시우리딘 (BrdU) 및 총 DNA 수준 (7-AAD)에 대해 염색된 집단의 세포주기 분석.
세포주기 분석을 위한 세포주기 및 BD Biosciences 솔루션에 대해 자세히 알아보십시오.
인간 PBMC를 항 -CD3 / CD28로 48 시간 동안 자극하고 PMA + ionomycine으로 4 시간 동안 재 자극 한 후 BrdU를 마지막 1 시간 동안 첨가했습니다. 이어서 세포를 수확하고 BrdU 염색 프로토콜을 사용하여 염색했습니다. 게이트 R3은 G0 기 세포를 포함하고, 게이트 G4는 S 기 세포를 포함하고, 게이트 R5는 G2 / M 기 세포를 포함하고, 게이트 R6은 핵산 함량을 상실하기 시작하는 아토포시스 또는 괴사 세포를 포함한다.
세포 증식 assay
세포 증식은 성장과 분열의 결과로 세포 수가 증가하는 것입니다. 세포 증식과 Apoptosis의 균형은 발달과 정상 조직 항상성 모두에 중요합니다. Cytokine 치료 또는 정제된 항체와의 수용체 가교와 같은 다중 자극은 세포 증식에 영향을 미칠 수 있습니다.
BrdU를 이용한 세포 증식 측정
BD Biosciences는 de novo DNA 합성을 측정하는데 사용되는 DNA 전구체 티미 딘의 유사 체인 BrdU를 측정하여 증식하는 세포를 검출하도록 설계된 일련의 항체 및 키트를 제공합니다.
세포주기 (DNA 합성)의 S 기 동안 BrdU는 새로 합성된 DNA에 통합되며 항 -BrdU 특정 항체에 의해 쉽게 검출될 수 있습니다. BrdU 검출 용으로 설계된 BD 항체 및 키트는 세포 내 유세포 분석 및 면역조직화학법에 모두에 사용할 수 있으며 BD Horizon ™ Violet 450 (V450), BD Horizon Brilliant Violet ™ 510 (BV510), BD Pharmingen ™ PerCP-Cy5.5 및 기타 포맷을 포함합니다.
DNA 증가 외에도 특정 단백질의 수준도 세포 증식의 결과로 증가합니다. 예를 들어, Ki67은 분열하는 세포의 핵에서 발현되는 항원입니다. 그러나 세포주기의 G0 기에서는 검출되지 않습니다. Ki67은 BrdU 및 VPD450과 같은 다른 증식 마커와 결합하여 신뢰도를 높일 수 있습니다. 이러한 마커는 세포 표면 및 기타 유형의 마커와 결합하여 세포 하위 집합 및 신호 경로에 대한 추가 정보를 얻을 수도 있습니다.
Apoptosis 및 세포사멸 분석 assay
Apoptosis 과정은 특정 형태학적 특징이 있습니다. 여기에는 원형질막의 변화 (예 : 막 대칭 상실 및 막 부착 상실), 세포질과 핵의 응축, 단백질 절단 및 DNA의 뉴클레오좀 간 절단이 포함됩니다. 이 과정의 마지막 단계에서 죽어가는 세포는 세포사멸체로 단편화되고 결과적으로 주변 세포에 대한 심각한 염증성 손상없이 식세포에 의해 제거됩니다. BD Biosciences는 세포 사멸 과정의 여러 단계에서 지표를 측정하기 위한 전체 범위의 세포 사멸 탐지 도구 및 기술을 제공합니다.
원형질막의 변화는 살아있는 세포에서 발견되는 세포 사멸 과정의 특징중 하나입니다. Apoptosis 는 일반적으로 원형질막의 세포질 표면에 위치한 포스파티딜세린 (PS)의 존재에 의해 검출될 수 있습니다. Apoptosis 동안 PS는 원형질막의 외부 막으로 이동하며 칼슘이 존재할 때 형광 색소 표지된 Annexin V에 결합하여 유세포 분석 및 세포 이미징에 의해 검출될 수 있습니다.
BD Biosciences는 FITC, PE, Violet 레이저 용 BD Horizon ™ BV421, UV 레이저 용 BD Horizon Brilliant ™ UV 395 (BUV395) 등 여러 형광으로 Annexin V를 제공합니다. 이러한 새로운 형광이 추가됨에 따라 이질적인 세포 하위 집합 내에서 Apoptosis를 관찰하기 위한 더 복잡한 분석을 개발할 수 있습니다.
원형질막이 손상되면 세포내Annexin V도 노출되기 때문에 7-AAD와 같은 막-불 투과성 염료는 일반적으로 세포사멸을 제외하기 위해 Apoptosis와 사멸 세포를 구별하는데 사용됩니다. Annexin V로 염색된 세포 집단은 Apoptosis 세포 집단만을 나타냅니다.
절단된 카스파제 및 PARP 측정
Apoptosis의 특징 중 가장 일관되게 관찰되는 특징 중 하나는 caspase라고 불리는 일련의 proteases의 활성화입니다. Caspase는 apoptosis의 초기 단계에 aspartate 잔기의 절단이 일어나며 활성화됩니다. 활성 caspase는 poly -ADP 리보스 중합 효소 (PARP), 기타 caspase및 기타 단백질 기질을 포함하여 많은 단백질을 한꺼번에 절단할 수 있습니다. 이것은 세포 구조와 기능의 손실로 이어지고 궁극적으로 세포 사멸을 초래합니다. Caspase-9, -8 및 -3은 apoptosis와 관련이 있는데 미토콘드리아 경로는 caspase -9, Fas / CD95 경로는 caspase -8, 그리고 여러 경로에 의해 활성화된 caspase-3는 apoptosis downstream 에 관여합니다.
BD Biosciences는 caspase, 특히 caspase -3을 측정하기 위한 다양한 시약을 제공합니다. 유세포 분석, 이미징, ELISA 및 western blotting에 사용할 수 있는 활성 형태의 caspase에 대한 항체를 제공합니다.
Caspase-3 절단 / 억제 반응
활성 caspases -3은 형광성 Ac-DEVD-AMC 기질에 결합하여 aspartic acid (D)와 AMC 사이를 절단하여 형광성 AMC를 방출하고 AMC 형광은 UV 분광 형광법에 의해 정량화됩니다. Ac-DEVD-CHO aldehyde 억제제는 caspases -3 활성 부위에 강하게 결합하여 기질결합을 차단합니다. 따라서 Ac-DEVD-AMC는 절단되지 않고 형광이 방출되지 않습니다.
BD Biosciences는 세포주기, 증식, 세포사멸 및 Apoptosis를 분석하기 위한 여러 프로토콜을 제공합니다.
연구용입니다. 진단용 또는 치료용으로 사용할 수 없습니다.
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