세포 내 유세포 분석은 세포 유형을 식별하고 세포주 및 이종 세포 샘플 내에서 신호 및 기능적 반응을 분석하는 강력한 기술입니다. Th17 및 regulatory T cell(Treg) 등 일부 유형의 세포에서 명확한 식별은 cytokine 또는 transcription factor 등 세포 내 marker의 조합에 따라 달라집니다. 또한 세포 내 유세포 분석은 세포 기능 및 신호 반응에 관한 풍부한 정보를 제공합니다. 세포 표면 marker에 특이적인 형광 항체를 세포 apoptosis, 세포 증식, 단백질 인산화의 marker와 결합하여 다양한 자극 또는 치료에 반응하는 세포 subset을 결정할 수 있습니다. 여러 Marker를 함께 사용하면 세포 당 더 많은 parameter를 측정할 수 있으므로 데이터 수집 시간이 단축되고 귀중한 샘플을 보존할 수 있습니다. Western blotting 및 기타 방법은 전체 세포 집단에 의해 발현되는 단일 단백질을 검사하는데 유용하지만 유세포 분석을 이용하면 개별 세포 수준에서 동시에 여러 단백질을 측정할 수 있습니다.
BD Biosciences는 fluorochrome 접합 항체, buffer, 키트 및 프로토콜을 제공하여 세포 내 유세포 분석을 용이하게 합니다. 당사의 항체는 생물학적으로 관련된 모델 시스템에서 테스트됩니다. 이렇게 확립된 도구는 면역학, 염증 및 줄기세포 생물학과 같은 분야에서 새로운 발견을 가능하게 합니다. BD fluorochrome-conjugated 항체, buffer, 키트 및 프로토콜을 포함하여 세포 내 cytokine 염색과 인 단백질 및 세포 내 유세포 분석을 통한 전사 인자 검출을 지원하는 도구와 기술을 찾아보십시오.
세포 내 염색의 기본 원리
세포 표면 염색 기술은 상대적으로 표준 기술이지만 세포 내 marker에 대한 최적의 염색은 종종 표적 단백질의 생물학에 따라 달라집니다. 세포 내 단백질의 위치, 다른 분자와의 연관성 및 안정성에 따라 다른 세포 준비 및 염색 방법을 사용할 것을 권장하고 있습니다. 예를 들어 cytokine은 일반적으로 분비되는 단백질입니다.
그러나 cytokine이 세포 내부에 갇혀 있으면 BD GolgiStop ™ (Monensin 함유) 또는 BD GolgiPlug ™ (Brefeldin A 함유)와 같은 단백질 수송 억제제를 사용하여 세포내 단백질로 염색될 수 있습니다. Cytokine은 BD Cytofix/Cytoperm ™ Fixation and Permeabilization Solution 에서 제공하는 부드러운 고정 및 투과를 이용하면 상대적으로 접근 가능합니다.
Cytokine과 달리 전사 인자는 종종 핵 내부에 국한되어 DNA 및 기타 단백질에 결합됩니다. Stat5와 같은 일부 단백질의 인산화는 관심대상 인산화 된 에피토프를 가려서 보이지 않게 하는 이량체 형성을 초래합니다. 또한 세포 내 포스파타제는 이러한 단백질을 빠르게 탈 인산화 할 수 있습니다. 따라서 치료 후 세포를 신속하게 고정하고 더 강력한 투과성 조건을 적용하여 항체가 핵에 들어가서 파괴된 분자 복합체 내에서 에피토프에 접근할 수 있도록 해야 합니다.
세포를 고정 및 투과화 (dashed line 막으로 표시)하고 염색하고 유세포 분석으로 분석합니다. Cytokine 생산에 관한 연구를 위해 세포를 먼저 단백질 수송 억제제로 처리하여 세포 내부에 표적 단백질이 축적되도록 할 수 있습니다.
BD Biosciences는 세포 내 유세포 분석을 지원하는 도구를 제공합니다.
세포 내 유세포 분석 assays를 촉진하기 위해 BD는 여러 키트, buffer 및 프로토콜을 개발했습니다. 또한 시간, 샘플 및 비용을 절약하기 위해 주요 세포 표면 marker에 특이적인 많은 형광 항체가 여러 buffer 시스템에서 테스트되었습니다. Buffer는 다음에 사용할 수 있습니다.
Cytokine 측정
BD Cytofix/Cytoperm™ Fixation/Permeabilization Solution (Cat. No. 554722)은 대부분의 cytokine과 세포 표면 Marker를 염색하는 데 적합합니다. 이 buffer 시스템은 일부 전사 인자 및 기타 세포 내 단백질을 염색하는 데에도 사용할 수 있습니다. 이 buffer시스템에는 포름알데히드 기반 고정제와 함께 순한 detergent가 포함되어 있습니다.
전사인자
BD Pharmingen ™ Transcription Factor Buffer Set (Cat. No. 562574/562725)는 전사 인자만 염색하거나 세포 표면 marker 및 cytokine과 함께 염색하도록 설계되었습니다. 이 버퍼 시스템에는 포름알데히드 기반 고정제와 함께 순한 detergent가 포함되어 있습니다.
인산화 단백질 측정
BD Phosflow ™ Perm Buffer III (Cat. No. 558050)는 유세포 분석을 통한 포스포에피토프(phosphoepitope) 측정에 권장되는 투과 buffer입니다. Perm buffer III는 harsh 알코올 기반 buffer입니다. 특정 실험 요구 사항을 수용하기 위해 대체 투과 buffer도 사용할 수 있습니다. 또한 buffer 호환성 도구, 일반 클론에 대한 상세한 설명, BD Phosflow™ Buffer 프로토콜과의 호환성 을 제공합니다.
사용된 투과화 기술은 세포 표면 및 기타 세포 내 항원의 측정에 부정적인 영향을 미칠 수 있습니다. 핵에 접근하고 DNA/ 단백질 또는 단백질 / 단백질 복합체를 개방하는 동일한 기술은 종종 세포 표면 항원을 변성시켜 항체에 의한 측정을 방지할 수 있습니다. 다른 세포 내 단백질의 측정에는 다른 조건이 필요할 수 있지만 기본 원리는 동일합니다. 세포는 고정 및 투과된 다음 형광 항체로 세포 내에서 염색됩니다.
STAT 포스포티로신 에피토프는 활성화된 세포 내에서 이량체화에 의해 가려 보이지 않습니다.
최적의 세포 투과성 조건은 에피토프 위치에 따라 다릅니다.
연구용입니다. 진단용 또는 치료용으로 사용할 수 없습니다.
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