진핵 세포의 증식, 복제 및 분열은 세포주기라고하는 고도로 통제된 일련의 과정에 의해 발생합니다. 적응 면역에서는 특정 T 및 B 림프구가 외래 항원 자극에 반응하여 클론 확장(분열, 증식 및 분화)을 하게 되는데, flow cytometry 분석, 면역형광법 또는 면역조직화학법을 사용하여 이러한 세포주기 상태를 쉽게 분석할 수 있습니다.
세포주기 및 세포증식 개요
면역, 염증, 조혈, 비정상 증식 및 기타 생물학적 반응과 관련된 기본적인 세포 메커니즘을 연구자들이 더 이해할 수 있도록 돕기 위해 BD Biosciences는 증식 반응을 측정하는 항체, 키트 및 시스템 등 다양한 도구를 제공합니다.
연구자들은 증식하는 개별 세포의 세포주기 상태 또는 조직에서의 위치를 Flow cytometry 분석, 면역형광법 또는 면역조직화학법을 사용하여 빠르고 정확하게 분석할 수 있습니다. 여기에 활용할 수 있는 도구는 다음과 같습니다.
- BD Biosciences의 세포 DNA content 분석을 위한 시약 및 BD Cycletest™ Plus Reagent Kit
- Propidium Iodide (PI), 7- amino actinomycin D (7-AAD), 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) 등의 DNA 염료
- 사이클린, 망막 모세포종 및 인산화된 히스톤 H3에 대한 항체
적응 면역에서는 특정 T 및 B 림프구가 외래 항원 자극에 반응하여 클론 확장(분열, 증식 및 분화)을 하게 되는데, flow cytometry 분석, 면역형광법 또는 면역조직화학법을 사용하여 이러한 세포주기 상태를 쉽게 분석할 수 있습니다. 진핵 세포의 증식, 복제 및 분열은 세포주기라고하는 고도로 통제된 일련의 과정에 의해 발생합니다.
세포주기
세포주기에는 두 가지 주요 단계가 있습니다. 중간 단계(유사 분열 사이의 단계)와 유사 분열 단계(모세포가 유전적으로 동일한 두 개의 딸세포로 나누어짐)입니다. 간기에는 세 개의 뚜렷한 연속적인 단계가 있습니다. G1이라는 첫 번째 단계에서 세포는 환경을 모니터링하고 필요한 신호를 받으면 세포가 RNA와 단백질을 합성하여 성장을 유도합니다. 조건이 맞으면 세포는 세포주기의 S기로 들어가 DNA 합성을 수행하고 염색체 DNA를 복제합니다. 마지막으로 G2 기에서 세포는 계속 성장하고 유사분열을 준비합니다.
세포 DNA content 분석
BD Bioscience는 세포주기 연구를 위한 다양한 시약을 제공합니다. 시약에는 PI (propidium iodide) 및 7-aminoactinomycin D (7-AAD)와 같은 핵산 염료 및 BD Cycletest ™ Plus Reagent Kit이 있습니다. BD Cycletest ™ Plus Reagent Kit에는 더 정확하게 DNA를 측정하기 위해 단백질과 RNA를 분해하는 시약과 PI가 포함되어 있습니다. 이후 유세포 분석을 통해 배수성 평가 및 비정상적인 DNA stemline을 식별하고, DNA 인덱스 (DI) 및 stemline의 세포주기 단계의 분포를 분석합니다. 세포주기 단계에서 DNA level이 변경되며, 이는 7-AAD와 같은 DNA 염료를 사용하여 세포의 특징적인 DNA content 프로파일을 생성할 수 있도록 합니다(아래 그림 참조).
세포가 세포주기의 단계를 거치면서 히스톤 H3 Ser28과 같은 단백질이 변형되거나 발현이 변경됩니다. DNA 복제를 촉진시키도록 히스톤이 변경되고, 복제 기전이 시작될 수 있도록 염색질이 열립니다. BD Biosciences는 이러한 단백질에 항체를 결합하여 이미징 또는 flow cytometry 분석이 가능하도록 지원합니다.
| 측정 | 시약 | 메커니즘 | 기술 | Sample Types |
|---|---|---|---|---|
| DNA | 세포 불투과성 염료: Propidium Iodide (PI), 7-aminoactinomycin D (7-AAD), DAPI, DRAQ7™, BD Via-Probe™ Green Nucleic Acid Stain, BD Via-Probe™ Red Nucleic Acid Stain
세포 투과성 염료: Hoechst 33342, Hoechst 34580, DRAQ5™ |
핵산 가닥으로 삽입 | Flow cytometry | Cell impermeable dyes: Fixed, permeabilized and
for live/dead discrimination in intact cells Cell permeable dyes: Intact cells (unfixed and unpermeabilized) |
| 새로 합성된 DNA | BrdU, BrdU kits 및BrdU항체 EdU 검출 키트 |
DNA 분할에서 bromodeoxyuridine (BrdU) 또는 ethynyl deoxyuridine은 thymidine(T)을 대체합니다. 이들은 BrdU에 대한 항체 또는 EdU 검출 시약으로 측정됩니다. | Flow cytometry (BrdU 및 EdU), 세포 이미징(BrdU 및 EdU), 면역조직화학법(BrdU만) | Fixed and permeabilized cells, treated tissues (cell imaging, immunohistochemistry only) |
| 단백질 양 | Ki67항체, PCNA | 증식으로 인해 단백질의 양이 증가합니다. | Flow cytometry, 바이오 이미징, 면역조직화학법, 웨스턴 블로팅 | Fixed cells, tissues and extracts |
| 단백질 양 | 사이클린, 망막 모세포종 (Rb), 기타 세포주기 마커에 대한 항체 | 단백질 양은 세포 주기의 단계에 따라 증가하거나 감소합니다. | Flow cytometry, 바이오 이미징, 면역조직화학법, 웨스턴 블로팅 | Fixed cells, tissues and extracts |
| 단백질 변형 | 인산화 된 히스톤 H3, 사이클린 의존성 키나제 (cdk)에 대한 항체 | 단백질은 증식 또는 세포주기 변화의 결과로 인산화됩니다. | Flow cytometry, 바이오 이미징, 면역조직화학법, 웨스턴 블로팅 | Fixed cells, tissues and extracts |
| Cytokines | BD® CBA (정량적 검출) | 세포가 증식하기 시작하면 cytokine 생성이 증가할 수 있습니다. | Flow cytometry | Tissue culture supernatants, EDTA plasma and serum samples |
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