Multicolor 유세포 분석은 관심있는 다양한 세포 subpopulation에 대한 신속한 multiparametric분석을 제공합니다. 응용 분야에는 면역학, 면역 종양학, 바이러스학, 면역 모니터링 등 여러 분야가 포함됩니다. BD Biosciences는 모든 laser 라인에서 혁신적인 dye를 개발하여panel design 유연성과 포괄적인 접합 항체 포트폴리오를 제공하여 표면, 세포 내 또는 secreted marker의 심층 특성분석을 지원합니다. 단순한 연구에서부터 복잡한 연구 응용 분야에 이르기까지 유세포 분석기 및 분류기에서 광범위한 시약 선택과 포괄적인 educational resources, tools 그리고 protocols, 을 제공하여 multicolor 유세포 분석 워크플로우 여정을 효율적으로 진행할 수 있도록 지원합니다.
Multicolor유세포 분석의 원리
유세포 분석은 세포 단위로 세포 집단을 분석합니다. 이 기능은 샘플 내 많은 세포 중에서 매우 적은 수의 세포를 찾고 있는 오늘날의 연구자 및 임상의에게 중요한 기능으로(예 : 건초 더미에서 바늘 찾기) 질병 상태 또는 생물학적 과정을 연구를 가능하게 합니다. 둘째, 유세포 분석은 매우 빠릅니다. 일상적인 샘플 분석 속도는 초당 최대 10,000 개의 세포에 이를 수 있습니다. 이는 세포를 시각적으로 검사하고 계수하는 기존 방법에 비해 놀라운 발전입니다. 마지막으로, 유세포 분석은 single cell의 여러 parameters (multiplexing)를 동시에 측정할 수있는 능력이 있습니다. Multiplexing을 통해 연구자와 임상의는 이전보다 빠르게 single sample 더 많은 정보를 수집할 수 있습니다. 이러한 기능 덕분에 연구원과 임상의에게 있어 유세포 분석은 다양하게 응용될 수 있는 강력한 도구가 되었습니다.
유세포 분석의 작동 원리
유세포 분석기에는 fluidics, 광학 및 전자의 세 가지 주요 시스템이 있습니다.
Fluidics system 은 세포 샘플 (예: 인간 혈액 샘플)을 단일 스트림으로 funneling하여 세포가 한 번에 하나씩 laser 빔을 통과하도록 합니다. 각 세포는 빔을 통과할 때 빛을 산란 시키고 형광 빛을 방출할 수 있습니다. 이러한 광 신호는 광학시스템에 의해 수집되어 다양한 detector로 전달됩니다. detector에 의해 수신된 신호는 전자 시스템에 의해 숫자 값으로 변환됩니다. 결과는 화면에 표시하거나 특별히 설계된 소프트웨어를 사용하여 향후 분석을 위해 저장할 수 있습니다.
각 세포가 빔을 통과할 때 해당 parameter(특성)가 빔을 통과 한 시간과 함께 측정 및 기록됩니다. 일반적으로 샘플 당 최소 10,000 개의 세포에 대한 데이터가 수집됩니다.
Sorting
먼저 유세포 분석기가 관심 대상세포를 식별할 수 있도록 parameter를 설정합니다. 샘플을 포함하는 fluid 흐름은 fluidics system 에 의해 고압에서 단일 흐름으로 유입되어 세포에 대한 정보가 측정되는 laser 빔을 통해 한 번에 하나씩 통과합니다. 세포가 지정된 parameter와 일치하면 세포계는 여기에 전하를 적용합니다. 이는 전하를 띄는 세포가 수집 튜브쪽으로 편향되게 합니다. 그후 연구원은 관심대상 세포를 가져와 배양에서 성장시키거나 다른 분석에서 연구할 수 있습니다. 전하를 띄지 않은 물방울은 계속해서 폐기물 용기로 흘러갑니다. 이 프로세스는 초당 최대 20,000 셀의 속도로 신속하게 수행될 수 있습니다.
실험에 가장 적합한 세포 분류기를 찾아보세요. BD Biosciences는 간단한 벤치탑 시스템에서 완전히 구성 가능한 고급 시스템에 이르기까지 다양하게 적용될 수 있는 연구용 세포분류기 를 제공합니다.
세포 특성 측정
세포가 laser 빔을 통과하면 빛이 다른 방향으로 산란됩니다. 빛이 산란되는 양과 방향을 측정하면 연구자들이 세포의 크기와 내부 복잡성을 모두 결정할 수 있습니다. 유세포 분석을 사용하면 한 번에 하나 이상의 세포 집단을 연구할 수 있으며, 세포 크기와 복잡성 이상의 정보를 얻을 수 있습니다.
세포 및 세포 활동의 marker로서의 fluorescence
Monoclonal antibodies 는 종종 laser에 의해 excited될 때 형광을 방출하는 형광 dye(형광 색소)와 연결됩니다. 형광 색소는 항체 또는 marker에 결합된 세포를 추적할 수 있도록 합니다. 대부분의 세포는 자연적으로 fluorescence light를 방출하지 않습니다. 그러나 형광 색소 태그가 붙은 monoclonal antibodies 가 세포에 존재하는 항원에 결합된 경우, 해당 세포가 유세포 분석기의 laser 빔을 통과할 때 형광 신호가 포착됩니다.
형광색은 방출할 빛의 색상에 따라 서로 다릅니다. 예를 들어 BD가 제공하는 형광색소 중 하나인 FITC는 green light를 방출하는 반면 BD가 제공하는 다른 형광 색소 중 하나인 PE는 유세포 분석기에서 사용되는 레이저에 노출될 때 orange light를 방출합니다. 서로 다른 형광색소를 사용하면 연구자들이 세포 집단이나 다른 세포 활동을 구별하는데 도움이 됩니다.
Fluorescence as a marker of cells and cellular activities
| Fluorochrome | Em-Max(nm) |
|---|---|
| BD Horizon™ BUV395 | 395 |
| BD Horizon™ BV421 | 423 |
| BD Horizon™ V450 | 450 |
| BD Pharmingen™ Pacific Blue™ | 455 |
| BD Horizon™ BV480 | 479 |
| BD Horizon™ BUV496 | 496 |
| BD Horizon™ V500 | 499 |
| BD Horizon™ BV510 | 512 |
| BD Horizon™ BB515 | 515 |
| Alexa Fluor™ 488 | 517 |
| BD Pharmingen™ FITC | 518 |
| BD Horizon™ BUV563 | 564 |
| BD Horizon™ BV570 | 573 |
| BD Pharmingen™ PE | 576 |
| BD Horizon™ BYG584-P | 583 |
| BD Horizon™ BV605 | 605 |
| BD Horizon™ BB630-P2 | 614 |
| BD Horizon™ BUV615 | 615 |
| BD Horizon™ PE-CF594 | 615 |
| BD Horizon™ BV650 | 649 |
| BD Horizon™ BUV661 | 660 |
| Fluorochrome | Em-Max(nm) |
|---|---|
| BD Horizon™ BB660-P2 | 660 |
| BD Pharmingen™ APC | 660 |
| BD Pharmingen™ Alexa Fluor™ 647 | 669 |
| BD Pharmingen™ PE-C5 | 670 |
| BD Pharmingen™ PerCP | 675 |
| BD Pharmingen™ PerCP-Cy5.5 | 676 |
| BD Horizon™ BB700 | 695 |
| BD Horizon™ APC-R700 | 706 |
| BD Horizon™ BV711 | 713 |
| BD Horizon™ Red 718 | 718 |
| BD Pharmingen™ Alexa Fluor™ 700 | 719 |
| BD Horizon™ BUV737 | 735 |
| BD Horizon™ BV750 | 754 |
| BD Horizon™ BB755-P | 755 |
| BD Pharmingen™ APC-Cy7 | 779 |
| BD Pharmingen™ PE-C7 | 781 |
| BD Pharmingen™ APC-H7 | 782 |
| BD Horizon™ BV786 | 786 |
| BD Horizon™ BV790-P | 790 |
| BD Horizon™ BUV805 | 803 |
BUV, BD Horizon Brilliant™ UV; BV, BD Horizon Brilliant Violet™; BB, BD Horizon Brilliant™ Blue; BYG, BD Horizon Brilliant™ Yellow-Green; -P, prototype dyes.
Multicolor 유세포 분석
서로 다른 유형의 세포는 서로 다른 조합의 항원을 보유하고 서로 다른 조합의 항체와 결합할 것입니다. 세포 샘플을 테스트하는데 사용되는 각 monoclonal antibody 가 다른 형광 색소에 연결되어 있는 경우, laser 빔을 통과할 때 방출되는 색상의 조합으로 세포 유형을 구별할 수 있습니다.
여러 형광 색소의 조합을 동시에 사용하면 서로 다른 세포 집단을 구별하는 능력이 더욱 향상됩니다. 아래 그림은 T 림프구를 찾기 위한 세포 샘플 시험에서 각각 다른 형광색소에 연결된 두 개의 다른 monoclonal antibodies 를 사용한 예입니다. 네 가지 유형의 세포가 분명하게 나타났습니다.
유세포 분석은 형광 기술의 유연성과 민감도를 고속 및 데이터 통합 기능과 결합합니다. 이는 세포 분석의 황금 표준이 되었으며 현재 생명 과학의 수많은 분야에서 분석 도구로 사용되고 있습니다.
Intracellular 유세포 분석
Intracellular 유세포 분석은 세포 유형을 식별하고 세포 주 및 이종 세포 샘플 내에서 신호 및 기능적 반응을 분석하는 강력한 기술입니다. BD Biosciences는 세포 내 유세포 분석을 용이하게하기 위해 다양한 시약, 키트 및 프로토콜 을 제공합니다. 세포 내 cytokine staining, 인 단백질 및 세포 내 유세포 분석을 통한 전사 인자 측정을 지원하는 BD fluorochrome-conjugated 항체, buffer, 키트 및 프로토콜을 포함한 도구와 기술을 찾아보십시오.
연구용입니다. 진단용 또는 치료용으로 사용할 수 없습니다.
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