适用于光谱流式细胞术的高亮度、低背景染料
BD Horizon RealRed™ 688（RR688）试剂是专为光谱流式细胞术Panel设计的高亮度、低背景荧光染料，主要由红色激光（627-640 nm）激发，具备以下优势：
- 高亮度荧光染料，支持检测低表达的表面和胞内标志物
- 交叉激光激发极少
- 针对光谱流式细胞仪实现兼容性优化设计
性能
相较于AlexaFluor™ 660，BD Horizon RealRed™ 688试剂亮度极高，交叉激光激发减少
RR688试剂的交叉激光激发极少
CD4（SK3）RR688、NovaFluor™ Red 685（NFR685）、Spark™ NIR 685及CD4（RPA-T4）AlexaFluor™ 660（AF660）的标准化发射光谱。数据在Cytek® Aurora流式细胞仪上采集。
RR688试剂可与APC和R718同时使用，以提升红色激光利用率，并为Panel设计提供额外选择
随着RR688的加入，光谱流式细胞术红色激光通道的可用检测位置增加到四个。
RR688试剂显示出极高亮度，可显著提升数据分辨率
全血样本使用CD4（SK3）RR688、NovaFluor™ R685、Spark™ NIR 685、cFluor® R685、CD4（RPA-T4）AlexaFluor™ 660（上图），或CD3（UCHT1）RR688或NovaFluor™ R685（下图）进行染色，并通过BD Pharm Lyse™溶血素进行裂解处理。细胞通过BD FACSymphony™ A5 SE流式细胞仪采集，并使用FlowJo™（v10）软件进行分析。
应用
人全血样本使用CD279（EH12.1）RR688和CD3（UCHT1）检测试剂进行染色，随后使用BD Pharm Lyse™溶血素进行裂解处理，通过BD FACSymphony™ A5 SE流式细胞仪采集数据，并使用FlowJo™（v10）软件进行光谱解混
A）依据BD Biosciences的细胞内细胞因子染色方案，使用CD4（SK3）BV421和FoxP3（259D/C7）RR699对PBMC进行染色。
B）人全血样本通过BD Phosflow™裂解/固定缓冲液进行处理，并使用颗粒酶B（GB11）RR688和CD8（RPA-T8）BV421进行染色。细胞通过BD FACSymphony™ A5 SE流式细胞仪采集，并使用FlowJo™（v10）软件进行光谱解混。
PBMC使用人CD4（SK3）RR688、R718或APC染色，通过Cytek® Aurora进行样本采集，并使用FlowJo™（v10）软件进行分析。 应用双色光谱解混矩阵，通过FlowJo™（v10）软件生成单色叠加图。
相似度指数值通过BD®光谱查看器生成，该工具使用在BD FACSDiscover™ S8细胞分选仪上采集的CD4单色染色数据。
计算方式详情请访问BD®光谱查看器https://www.bdbiosciences.com/en-us/resources/bd-spectrum-viewer
BD Horizon™ RR688试剂表现出稳定的性能，在备货型生产试剂和BD OptiBuild™按需生产试剂之间具有批间一致性。人全血样本使用四个不同染料批次的人CD3（UCHT1，左图）或CD4（SK3，右图）RR688进行染色，并通过BD Pharm Lyse™裂解缓冲液进行裂解处理。所有抗体特异性均在Cytek® Aurora光谱分析仪上进行检测。CD3和CD4分别在不同实验中检测。
多色流式细胞术
在通过BD FACSDiscover™ S8细胞分选仪采集的30色光谱流式细胞术Panel中，BD Horizon™ RR688试剂表现卓越
BD Horizon RealRed™、RealYellow™及RealBlue™试剂在30色人光谱免疫表型分析Panel中呈现卓越兼容性
采用BD Horizon™ Brilliant Stain Buffer Plus试剂，用活细胞染料及针对细胞表面标志物的抗体对人外周血单个核细胞进行染色。在BD FACSDiscover™ S8细胞分选仪上对细胞进行分析，并使用FlowJo™（v10）软件分析数据。图中展示了用于免疫表型分析的圈门策略，该策略在排除死细胞和双联体后，可实现对树突状细胞、单核细胞、B细胞、NK细胞亚群及T细胞亚群的检测。
30色光谱流式细胞术Panel的荧光染料标志物分配
| 特异性 | 克隆 | 荧光染料 | |
|---|---|---|---|
| UV 355 nm | CD2 | RPA-2.10 | |
CD8 | RPA-T8 | ||
CD14 | 63D3.rMAb | ||
CD19 | HIB19 | ||
TCR | 11F2 | ||
CD45 | HI30 | ||
| Violet 405 nm | CCR7 | 2-L1-A | |
CD45RA | HI100 | ||
Viability | N/A | ||
CD38 | HB7 | ||
CD123 | 9F5 | ||
CD161 | DX12 | ||
CD16 | 3G8 | ||
| Blue 488 nm | CD3 | UCHT1 | |
CD57 | NK-1 | ||
CD25 | 2A3 | ||
CX3CR1 | 2A9-1 | ||
PD-1 | EH12.1 | ||
CD127 | HIL-7R-M21 | ||
CD28 | CD28.2 | ||
| Yellow-Green 561 nm | KLRG1 | Z7-205.rMAb | |
CD4 | SK3 | ||
CD95 | DX2 | ||
TIM-3 | 7D3 | ||
CD11c | B-ly6 | ||
CD27 | M-T271 | ||
| Red 640 nm | CD56 | NCAM16.2 | |
CD20 | 2H7 | ||
TIGIT | TgMab-2 | ||
HLA-DR | G46-6 |
通过BD FACSDiscover™ S8细胞分选仪采集的30色光谱流式细胞术Panel的荧光染料标志物分配。
缓冲液兼容性图
BD Horizon RealRed™ 688试剂与多种固定和破膜系统兼容
| 缓冲液 | 结果 |
BD FACS™流式细胞分析用溶血素和BD Pharm Lyse™裂解缓冲液 | 兼容 |
| 1%多聚甲醛（PFA） | 至少在24 h内稳定 |
| BD Cytofix/Cytoperm™固定剂和破膜剂 | 与固定前后抗体染色兼容 |
| BD FACS™破膜剂2 | 与固定前后抗体染色兼容 |
| BD Phosflow™破膜缓冲液III | 与固定前后抗体染色兼容 |
| EDTA和肝素 | 兼容 |
| BD Horizon™ Brilliant染色缓冲液（BSB） | 兼容 |
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Poster
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Performance Guide
BD流式细胞仪是Ⅰ类激光产品。仅供研究使用。不用于诊断或治疗程序。
CF是Biotium, Inc.的商标，Cy是Global Life Sciences Solutions Germany GmbH或其附属公司Cytiva的商标。CellBlox为Thermo Fisher Scientific的商标。