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スペクトルフローサイトメトリーに適した明るく低バックグランドの蛍光色素
BD Horizon RealRed™ 688(RR688) 試薬は、スペクトルフローサイトメトリーパネルにおいて、Redレーザー(627~640 nm)によって主に励起される、明るくクリアな蛍光色素です。
- 低発現の細胞表面および細胞内マーカーの検出をサポートする高輝度蛍光色素
- レーザー間の励起干渉が最小限
- スペクトルフローサイトメーターとの最適な互換性
RR688試薬は、スペクトルフローサイトメトリーパネルでの使用に最適化されています。
| Format | Ex Max | Em Max | Spectral | Conventional | Relative Brightness | Spillover* (1 = low, 4 = high) | Alternative To |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| RR688 | 669 nm | 688 nm | ✓ | _ | 2 | Alexa Fluor™ 660, Spark NIR™ 685, NovaFluor™ R685, cFluor® R685 |
*Value may vary based on instrument configuration and settings. Spillover ranking is based on cross-laser excitation on five-laser spectral instruments and does not take into account spillover into adjacent detectors.
Performance
BD Horizon RealRed™ 688試薬は、AlexaFluor™ 660と比較して、非常に高い蛍光強度を持ち、レーザー間の励起干渉が抑えられています。
RR688試薬は、レーザー間の励起干渉が低減されています。
CD4(SK3)RR688、NovaFluor™ Red 685(NFR685)、Spark™ NIR 685、およびCD4(RPA-T4)AlexaFluor™ 660(AF660)の正規化された発光プロファイル。データはCytek® Auroraセルアナライザーで取得されました。
RR688試薬は、APCやR718と組み合わせて使用することで、Redレーザーの活用範囲を広げ、パネルデザインのフレキシビリティををさらに高めることができます。
RR688の追加により、赤色レーザーを使用したスペクトルフローサイトメトリーには、Redレーザーで4種類の測定が可能になります。
RR688試薬は非常に高い蛍光強度を持ち、より精細なデータ解析が可能になります。
全血を、CD4(SK3)RR688、NovaFluor™ R685、Spark™ NIR 685、cFluor® R685、CD4(RPA-T4)AlexaFluor™ 660(上段)、またはCD3(UCHT1)RR688、NovaFluor™ R685(下段)で染色し、BD Pharm Lyse™ 溶解液で溶解処理しました。細胞はBD FACSymphony™ A5 SEセルアナライザーで取得・解析され、FlowJo™(v10)ソフトウェアで解析されました。
Applications
ヒト全血をCD279(EH12.1)RR688およびCD3(UCHT1)FITCで染色し、BD Pharm Lyse™ 溶解液で溶解処理を行いました。細胞はBD FACSymphony™ A5 SEセルアナライザーで取得・解析され、FlowJo™(v10)ソフトウェアを用いてスペクトル分離されました。
A) PBMC(末梢血単核細胞)を、BD バイオサイエンスの細胞内サイトカイン染色プロトコールに従って、CD4(SK3)BV421およびFoxP3(259D/C7)RR699で染色しました。
B) ヒト全血にBD Phosflow™ Lyse/Fix Bufferで処理を行い、Granzyme B(GB11)RR688およびCD8(RPA-T8)BV421で染色しました。
細胞はBD FACSymphony™ A5 SEセルアナライザーで取得・解析され、FlowJo™(v10)ソフトウェアを用いてスペクトル分離されました。
PBMC(末梢血単核細胞)を、ヒトCD4(SK3)RR688、R718、またはAPCで染色し、Cytek® Auroraで取得・解析しました。FlowJo™(v10)ソフトウェアを使用して、2色のアンミキシングマトリックスを適用し、単色のオーバーレイを作成しました。
類似性指数は、BD® Spectrum Viewerツールを使用して作成されました。このツールでは、BD FACSDiscover™ S8セルソーターで取得されたCD4単色染色データを使用しています。
スコアの算出方法についての詳細は、BD® Spectrum Viewerをご覧ください。
BD Horizon™ RR688試薬は、made-to-stock試薬(通常カタログ試薬)およびBD OptiBuild™ オンデマンド試薬ともに、ロット間の一貫性を保ち、安定した性能を示します。ヒト全血に、4つの異なる色素ロットを使用して、ヒトCD3(UCHT1、左)またはCD4(SK3、右)RR688で染色し、その後BD Pharm Lyse™溶解バッファーで溶解処理を行いました。すべての特異性は、Cytek® Auroraスペクトルアナライザーで測定されました。CD3とCD4は、それぞれ別の実験で検証されました。
Multicolor Flow Cytometry
BD Horizon™ RR688試薬の優れた分析能は、BD FACSDiscover™ S8セルソーターを用いたスペクトルフローサイトメトリー30カラーパネル解析で実証されています。
BD Horizon RealRed™、RealYellow™、RealBlue™ 試薬は、30カラーのスペクトルヒト免疫表現型解析パネルにおいて、相互に良好な性能を発揮します。
ヒト末梢血単核細胞(PBMC)は、生存染色用色素および細胞表面マーカーに対する抗体で染色され、BD Horizon™ Brilliant Stain Buffer Plusを使用しました。細胞はBD FACSDiscover™ S8 セルソーターで取得・解析され、FlowJo™(v10)ソフトウェアで解析されました。死細胞およびダブレットを除外した後、樹状細胞、単球、B細胞、NK細胞サブセット、T細胞サブセットの検出を含む免疫表現型解析のゲーティング戦略が示されています。
30カラースペクトルフローサイトメトリーパネルにおける蛍光色素・マーカー一覧
| Specificity | Clone | Fluorochrome | |
|---|---|---|---|
| UV 355 nm | CD2 | RPA-2.10 | |
CD8 | RPA-T8 | ||
CD14 | 63D3.rMAb | ||
CD19 | HIB19 | ||
TCR | 11F2 | ||
CD45 | HI30 | ||
| Violet 405 nm | CCR7 | 2-L1-A | |
CD45RA | HI100 | ||
Viability | N/A | ||
CD38 | HB7 | ||
CD123 | 9F5 | ||
CD161 | DX12 | ||
CD16 | 3G8 | ||
| Blue 488 nm | CD3 | UCHT1 | |
CD57 | NK-1 | ||
CD25 | 2A3 | ||
CX3CR1 | 2A9-1 | ||
PD-1 | EH12.1 | ||
CD127 | HIL-7R-M21 | ||
CD28 | CD28.2 | ||
| Yellow-Green 561 nm | KLRG1 | Z7-205.rMAb | |
CD4 | SK3 | ||
CD95 | DX2 | ||
TIM-3 | 7D3 | ||
CD11c | B-ly6 | ||
CD27 | M-T271 | ||
| Red 640 nm | CD56 | NCAM16.2 | |
CD20 | 2H7 | ||
TIGIT | TgMab-2 | ||
HLA-DR | G46-6 |
Fluorochrome marker assignment for a 30-color spectral flow cytometry panel run on the BD FACSDiscover™ S8 Cell Sorter.
Buffer Compatibility
BD Horizon RealRed™ 688試薬は、幅広い固定剤および透過化剤で利用可能
| Buffers | Results |
| BD FACS™ Lysing Solution and BD Pharm Lyse™ Lysing Buffer | Compatible |
| BD Cytofix™ Fixation Buffer | Stable at least 24 hours |
| 1% PFA | Stable at least 24 hours |
| BD Cytofix/Cytoperm™ Fixation and Permeabilization Solution | Compatible with antibody staining before and after fixation |
| BD FACS™ Permeabilizing Solution 2 | Compatible with antibody staining before and after fixation |
| BD Phosflow™ Perm Buffer III | Compatible with antibody staining before and after fixation |
| EDTA and Heparin | Compatible |
| BD Horizon™ Brilliant Stain Buffer (BSB) | Compatible |
For Research Use Only. Not for use in diagnostic or therapeutic procedures.
本製品は研究用です。疾病の診断・治療または予防に使用することはできません。
CF is a trademark of Biotium, Inc. Cy is a trademark of Global Life Sciences Solutions Germany GmbH or an affiliate doing business as Cytiva. CellBlox is a trademark of Thermo Fisher Scientific.