Bead-Based Immunoassays

ELISAに代わるフローサイトメトリによるタンパク多項目同時定量解析

1サンプルから多種類のタンパクを、同時に定量解析できるアプリケーションです。 サイトカインやリン酸化タンパクをはじめとする、様々なタンパクを測定できます。 従来法のELISAやWBと比較して、サンプル量が少量かつ、検体処理時間が短いため、簡単に実験操作を行うことができます。

BD CBA Flex Sets では、自由に実験項目を組み合わせることができます。

BD CBA Enhanced Sensitivity Flex Sets では、0.274pg/mL の低濃度領域が測定可能です。自由に実験項目を組み合わせることができます。

BD CBA Kits は、Ready to Useの決まった項目ですぐに実験することができます。

アッセイの原理 キット Flex セット 高感度Flexセット Functional ビーズ

BD CBA Multiplexed Bead-Based Immunoassays

1サンプルから多種類のタンパクを、同時に定量解析できるアプリケーションです。 サイトカインやリン酸化タンパクをはじめとする、様々なタンパクを測定できます。 従来法のELISAやWBと比較して、サンプル量が少量かつ、検体処理時間が短いため、簡単に実験操作を行うことができます。

BD CBA アッセイの原理

標的タンパクに対する抗体がコーティングされた蛍光強度の異なる捕捉用ビーズ(Capture Beads)と検出用抗体(PE標識)で標的タンパクを検出します。Capture Beads-標的タンパク-検出用抗体の複合体を形成することで標的タンパクを捕捉するサンドイッチ法で反応させます。
インキュベーション後、洗浄を行い、フローサイトメーターで測定します。
測定タンパク毎に固有の蛍光強度をもつ捕捉用ビーズでタンパクの種類を特定し、同時に検出用抗体の蛍光量でタンパクの濃度を測定します。

専用解析用ソフト FCAP Array v3.0で検量線を作成し、検体の定量解析を行います。

決まった組み合わせの項目で一貫性のある結果を

BD™ CBA Kit は、特定の組合わせで、Ready to Use キットとしてすぐにお使いいただくことができ、ルーチンの測定にも最適です。実験に必要な試薬がすべて含まれているため簡単にお使いいただけます。 測定項目は、研究分野によって3 -7 種類のタンパクを同時に定量解析できます。(例, Th1/Th2 、炎症性サイトカインなど) 解析には、CBA Flex set シリーズと同様に、CBA 解析専用ソフトFCAP Array v3.0 を用います。 ブルーレーザー(488nmレーザー)搭載機器で測定可能です。ブルーレーザー及びレッドレーザー(488nm及び633nmレーザー)あるいは、グリーンレーザー及びレッドレーザー(532nm及び633nmレーザー)搭載フローサイトメーターが最適です。詳しくは、下記の表をご参照ください。 キットには必要なバッファーと試薬が含まれ、80テスト測定可能です。

Ready to Use の決まった組み合わせの項目ですぐに測定

BD™ CBA Flex Set は、必要な測定項目の組み合わせを、自由に変えることができます。ヒト、マウス、ラットの可溶性タンパク製品、ヒト免疫グロブリン製品、シグナル伝達関連リン酸化タンパク製品をご提供しています。目的の項目を選択し、各々の製品ラインに最適なバッファーキットと合わせてご使用いただくことで、1項目から30 項目同時に測定することができます。ブルーレーザー及びレッドレーザー(488-nm及び633-nmレーザー)、あるいはグリーンレーザー及びレッドレーザー(532-nm及び633-nmレーザー)搭載フローサイトメーターで測定可能です。(詳しくは、下記の表をご参照ください。) 1項目から複数の項目を組み合わせた実験系に対応でき、一貫性のあるデータで確信をもって測定できます。


BD CBAキットとFCAP Array パラメーター

機器
レポーターパラメーター
クラスタリングパラメーターClustering

BD FACSVerse フローサイトメーター

PE

CBA Red

BD Accuri C6 フローサイトメーター

FL2

FL4

BD FACSArray™ バイオアナライザー

Yellow

Red

BD FACSCanto™ II フローサイトメーター

PE

APC

BD LSRFortessa™ セルアナライザー

PE

APC

BD FACSAria™ III セルソーター

PE

APC

BD FACSCalibur™フローサイトメーター(1レーザー)

FL2

FL3

BD FACSCalibur™フローサイトメーター(2レーザー)

FL2

FL4

自由に測定項目を組み合わせることができる柔軟性

BD™ CBA Flex Set は、必要な測定項目の組み合わせを、自由に変えることができます。ヒト、マウス、ラットの可溶性タンパク製品、ヒト免疫グロブリン製品、シグナル伝達関連リン酸化タンパク製品をご提供しています。目的の項目を選択し、各々の製品ラインに最適なバッファーキットと合わせてご使用いただくことで、1項目から30 項目同時に測定することができます。
ブルーレーザー及びレッドレーザー(488-nm及び633-nmレーザー)、あるいはグリーンレーザー及びレッドレーザー(532-nm及び633-nmレーザー)搭載フローサイトメーターで測定可能です。(詳しくは、下記の表をご参照ください。) 1項目から複数の項目を組み合わせた実験系に対応でき、一貫性のあるデータで確信をもって測定できます。

BD CBA Flexセットの測定項目組合わせから解析までの流れ

  1. 測定したい項目を各BD™ CBA Flex Set 製品ラインの中から選びます。
    BD™ CBA FlexSet には、スタンダード試薬、捕捉用ビーズ試薬、検出用抗体が含まれています。 ※組み合わせは、各製品ラインチャート表毎の項目からのみ選択できます。
  2. 各CBA Flex set 製品ライン毎に最適なバッファーキット(Master Buffer Kit)が決まっています。100 テストあるいは500 テストを選択します。
    Master Buffer Kit には、実験に必要なサンプル調整用試薬や機器設定用試薬が含まれています。
  3. Master Buffer kit に添付されているマニュアルに従ってアッセイを行います。
    日本語版の、アッセイマニュアル、機器設定マニュアル、解析マニュアルもございますので、tech_cell@bd.com までお問い合わせください。
  4. 下表、2レーザー搭載フローサイトメーターで測定します。
  5. CBA 専用解析ソフトFCAP Array™ v3.0でデータを解析します。
    FCAP Array ソフトウェア で検量線を作成し、検体の定量解析を行います。
機器 レポーターパラメーター クラスタリングパラメーター
BD FACSVerse™ フローサイトメーター PE CBA Red and CBA NIR
BD Accuri™ C6 フローサイトメーター* FL2 FL4 (675/25) and FL3 (780/60)
BD FACSArray™ バイオアナライザー Yellow Red and NIR
BD FACSCanto™ II フローサイトメーター PE APC and APC-Cy™7
BD LSRFortessa™ セルアナライザー PE APC and APC-Cy7
BD FACSAria™ III セルソーター PE APC and APC-Cy7
BD FACSCalibur™ フローサイトメーター FL2 FL4 and FL3

1 pg/mL以下のサイトカイン検出

高感度BD™ CBA Flex Set は、従来では検出限界以下となり数値化できなかった検体においても、サイトカイン濃度の定量化が実現します。従来のビーズアッセイの検出限界が5 - 10 pg/mL であるのに対し、35 倍の感度0.274 pg/mLまで検出することができます。この技術により、培養初期のサンプルなどの低濃度領域を測定することができるようになりました。炎症や白血球分化に関与するヒト及びマウスのサイトカインから必要な項目を選択していただけます。

1サンプルから、短時間で様々な情報を

多項目を1 サンプルから測定することができるので、少量サンプルや貴重なサンプルを有効に活用することが できます。従来法のELISA やWB では同等量で1 項目測定ですが、BD™ CBA高感度Flexセット では25-50 μL のサンプルで10項目のタンパクを測定することができます。

自由に測定項目を組み合わせることができるReady to use試薬

BD CBA Flexセットの技術に基づいている1項目から複数の項目を組み合わせた実験系に対応でき、一貫性のあるデータで確信をもって測定できます。 目的の項目を選択し、最適なマスターバッファーキットとプロトコールを合わせてご使用いただくことで、多項目同時に測定することができます。

一貫したアッセイシステム

1項目から複数の項目を組み合わせた実験系に対応でき、一貫性のあるデータで確信をもって測定できます。セットに含まれる抗体は、標準物質に対するダイナミックレンジ、感度、検量線の直線性を予めテストされたペア抗体です。また、BD CBA Flexセットと同様の標準物質を用いて、タンパク量を検出するため、双方のFlexセットから得られる結果は相関性があります。バックグラウンドが低く、シグナルが明確になるようテストされた最適なアッセイプロトコルで一貫した結果を得ることができます。

機器 レポーターパラメーター クラスタリングパラメーター
BD FACSVerse™フローサイトメーター PE CBA Red and CBA NIR
BD Accuri™ C6 フローサイトメーター* FL2 FL4 (675/25) and FL3 (780/60)
BD FACSArray™ バイオアナライザー Yellow Red and NIR
BD FACSCanto™ II フローサイトメーター PE APC and APC-Cy™7
BD LSRFortessa™ セルアナライザー PE APC and APC-Cy7
BD FACSAria™ III セルソーター PE APC and APC-Cy7
BD FACSCalibur™ フローサイトメーター FL2 FL4 and FL3

追加して測定したいタンパクの捕捉用ビーズを作製

BD™ CBA Functional Bead とは、捕捉用ビーズを作製するためのシステムです。お手持ちの抗体を架橋剤を用いて7.5 μmのポリスチレンビーズへと共有結合させることで、オリジナルのBD™ CBA システムを構築することが可能となります。「ビーズ」、「結合用バッファーセット」「結合評価用試薬」をそれぞれ取り揃えております。

Functional bead conjugation

Reagents and Kits Instruments Featured Products

The BD™ CBA Flex Set system provides an open and configurable menu of bead-based reagents designed to make it easy to create multiplex assays.

Available specificities include soluble protein assays for detection of human, mouse, or rat cytokines, chemokines, and growth factors; human immunoglobulins; and cell signaling assays for detection of phosphorylated cell signaling proteins. Up to 30 analytes can be measured simultaneously using the BD CBA Flex Set system on a flow cytometer equipped with 488-nm and 633-nm lasers.

Featured Products

BD™ CBA Kits provide preconfigured panels for ultimate ease of use and enable multiplex analysis of complex biological samples on a flow cytometer. In contrast to BD CBA Flex Sets, the kits are preconfigured by functional areas of biology (eg, Th1/Th2 or inflammatory cytokines) to measure up to seven analytes simultaneously using capture beads that contain unique amounts of a single red dye. The unique spectral properties of this dye enable analysis of samples on flow cytometers that have a single 488-nm laser or on dual-laser (488-nm and 633-nm) flow cytometers. Each kit comes complete with all of the buffers and reagents necessary to analyze 80 samples.

Featured Product

Featured Instrument

Featured Software

Kits Flex Sets Enhanced Sensitivity

ビーズの蛍光強度

IL-12p70及びTNF標準曲線の代表例

IL-10及びIL-6標準曲線の代表例

IL-1β 及びIL-8標準曲線の代表例

Titration curve comparison BD CBA vs NIBSC/WHO

Titration curve comparing the BD CBA Human IFN-γ recombinant standard to the NIBSC/WHO International Standard.

Titration Curve Comparison - Large

NIBSC conversion factor summary for BD CBA Kit Standards

Comparison of BD CBA Standards to the NIBSC/WHO International Standards. Download and print a PDF of this document.

BD CBA 30項目アッセイ

刺激処理を行ったヒトPBMC

phospho-ERK1/2 タンパク量検出

BD CBA Functional Bead Assayの例

Titration curve comparison BD CBA vs NIBSC/WHO

Titration curve comparing the BD CBA Human IFN-γ recombinant standard to the NIBSC/WHO International Standard.

Titration Curve Flex Set Comparison - Large

NIBSC conversion factor summary for BD CBA Flex Set Standards

Comparison of BD CBA Standards to the NIBSC/WHO International Standards. Download and print a PDF of this document.

BD CBA Flex セット とBD CBA 高感度Flex セットの比較

BD™ CBA Flex Setと BD CBA Enhanced Sensitivity Flex Setsの比較

リソース Instrument Setup ツール

製品冊子

FAQ

製品Information Sheet

製品リスト

ユーザーズガイド・マニュアル

学術オンライントレーニング

CBA Kits

BD Accuri™ C6 flow cytometer

BD FACSAria™ III cell sorter

BD FACSArray™ flow cytometer

BD FACSCalibur™ flow cytometer

BD FACSCanto™ II flow cytometer

BD FACSVerse™ flow cytometer

BD LSRFortessa™ flow cytometer

Flex Sets

BD Accuri™ C6 flow cytometer

BD FACSAria™ III cell sorter

BD FACSCalibur™ flow cytometer

BD FACSCanto™ II flow cytometer

BD FACSVerse™ flow cytometer

BD LSRFortessa™ flow cytometer


*Requires the BD Accuri Selectable Laser Module (Cat. No. 653126)

Cy™ is a trademark of Amersham Biosciences Corp. Cy™ dyes are subject to proprietary rights of Amersham Biosciences Corp and Carnegie Mellon University and are made and sold under license from Amersham Biosciences Corp only for research and in vitro diagnostic use. Any other use requires a commercial sublicense from Amersham Biosciences Corp, 800 Centennial Avenue, Piscataway, NJ 08855-1327, USA.

FCAP Array is a trademark of Soft Flow Hungary Ltd.